样品的采集与处理_百替生物.pdf

第一章 样品的采集和处理 1 范围 本章规定了用于HIV检测的HIV血清、血浆和全血样品的采集和处理方法，适用于HIV抗体、抗 + + 原、核酸检测、CD /CD 测定和HIV分离培养。 4 8 2 规范性引用文件 Guidelines for Using HIV Testing Technologies in Surveillance WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16 UNAIDS/01.22E ISBN 9713-92-063-7. 3 操作步骤 3.1 样品的采集 艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。 常用的血液样品的采集方法如下： 3.1.1 血清样品采集：用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置1-2h， 待血液凝固和血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清备用。 3.1.2 抗凝血样品采集：用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝 剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD /CD 测定4+ 8+ 可选用KEDTA或肝素或枸橼酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用KEDTA和枸橼酸钠。但 3 3 目前抗体检测快速法应尽量避免使用KEDTA的抗凝血浆 3 3.1.3 采样注意事项 1）采集样品应按临床采血技术规范及试剂盒说明书要求进行。 2）采集样品时应注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层手套。 建议采用真空采血管及蝶形针具，避免直接接触血液。采样后应尽快将采血器毁形。 3.2 样品的保存 3.2.1 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存 放于2-8℃。 3.2.2 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下，进行病毒RNA检测的样品如需 保存3个月以上应置于-80℃。 3.3 样品的运送 3.3.1 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。应采用WHO提出的三级 包装系统：第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记， 标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随 样品应附有送检单，送检单应与样品分开，不能混放。第二层容器：要求耐受性好，防渗漏，容纳并 保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒 service@100 service@100 wwwwww..110000bbiiootteecchh..ccoomm sseerrvviiccee@@110000bbiiootteecchh..ccoomm 处理。第三层容器：放在一个运输用外层包装内，在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。 3.3.2 样品应在2-8℃条件下由专人运送。用于抗体检测的样品可在48h内室温递送。每一包装的体 积不得超过50ml。运送感染性材料必须有记录。 3.3.3 特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须按三级包装系统将盛 样品的试管包扎好，避免使用玻璃容器，以保证不会破碎和溢漏。(接受样品的人应填写样品受理单) 3.4用于核酸定性检测样品的采集、处理及保存 3.4.1如有条件，采集的抗凝全血应在4-8h以内分离PBMC和血浆，否则应在24-48h内分离血浆和血 细胞； 3.4.2以上处理的样品，均要求在-20℃以下冻存； 3.4.3如分离血浆仍有困难，可直接将抗凝血-20℃以下冻存，采用冰壶冷冻运输，避免冻融。 3.5 样品的接收 3.5.1 含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用 后的包裹应进行消毒。 3.5.2 核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，