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HE33 小型潜水电泳装置操作说明 1 目录 1.将底部充入冷却液3 2.准备溶液3 3.凝胶制备4 4. 电泳5 2 1.将底部充入冷却液 1)准备 600mL 的 50%乙二醇。可用 50mL 的注射器或者泵将冷却液注入到基座。（为了使点样 时更清楚的看见点样孔，可在冷却液中加入一到两滴可溶性染料或食用色素。） 2)将螺纹塑料塞塞入开口处，注意使螺纹之间正确的啮合，然后将塑料塞转动到松紧刚合适 处，再继续转动 1/8~1/4 以防冷却液泄露。 3)在使用之前，将准备好的基座放在不低于-20℃的冰桶、冷藏室或冷冻室保持一个小时。 （冷却液无需替换） 2.准备溶液 1)准备 250mL 电泳缓冲液。 1 10X Tris-borate-EDTA (TBE) stock buffer (0.89 M Tris, 0.89 M boric acid, 20 mM EDTA, pH 8.2, 1000 ml) Tris base (FW 121.1) 0.89 M 108.0 g Boric acid (FW 61.8) 0.89 M 55.0 g EDTA solution (0.5 M, pH 8.0, soln. 3) 0.02 M 40.0 ml Deionized H2O to 1000.0 ml 2 10X Tris-acetate-EDTA (TAE) stock buffer (0.4 M Tris, 0.2 M acetic acid, 10 mM EDTA, pH 8.4, 1000 ml) Tris base (FW 121.1) 0.40 M 48.4 g Acetic acid (99.5%) 0.20 M 11.4 ml EDTA solution (0.5 M, pH 8.0, soln. 3) 0.01 M 20.0 ml Deionized H2O to 1000.0 ml 3 EDTA solution (ethylenediamine tetraacetic acid) (0.5 M, pH 8.0, 100 ml) Na2EDTA·2H2O, (FW 372.2) 0.5 M 18.6 g Deionized H2O to 70.0 ml NaOH (10 M) to pH 8.0 5.0 ml Deionized H2O to 100.0 ml 2）准备上样缓冲液。 Loading buffer (5X, 25% Ficoll 400, 0.25% Bromphenol blue†, 10 ml) Deionized H2O to 7.0 ml Ficoll400 2.5 g Bromphenol blue (FW 691.9) 25.0 mg Deionized H2O to 10.0 ml 3 3）确定体积：每 mm 厚度的凝胶需准备约 7mL 的琼脂糖溶液。 确定浓度： 溶解：称量琼脂糖，量取电泳缓冲液，加热溶解。 倒胶：待溶液冷却至 50 ℃时，倒入制胶盘中。 可在凝胶溶液中加入 0.5ug/mL 的溴化乙锭以便观察电泳分离。 注意：溴化乙锭是已知的诱变剂，操作时需戴手套。 3.凝胶制备 1）安装跑胶盘。 2 ）准备梳子 。 将梳子上的两个插槽置于松开的螺丝头和梳子架的中间。旋转螺丝头直至梳子刚好被支持起。 调节梳子直至梳子底部与跑胶盘相距 1.0mm。拧紧螺丝头缚住梳子。如若需要，可插入两 个梳子，第二个梳子可放在凝胶的中央。 4 3 ）移去梳子装配，将制胶装配放置于水平面上使其保持水平，以跑胶盘里的水平尺为标准。 4 ）将冷却至 50 ℃以下的琼脂糖溶液倒入制胶盘。安装梳子装置。检查梳子是否垂直，防 止凝胶孔歪曲。胶凝固过程至少需 30 分钟。 5 ）胶凝固以后，小心地移开梳子。将梳子的一端部分提起并稍微倾斜，慢慢的从凝胶中拔 出梳子。 6 ）移出跑胶盘和凝胶，将其转移到已冷却的基座。 4. 电泳 1）倒入电泳缓冲液。缓冲液表面高于凝胶表面约 1mm(大约需要 220mL）。 2 ）上样。将样品与上样缓冲液混匀。使用微量移液管上样。注意避免刺穿上样孔底