噬菌体生物扩增法结合荧光染色法快速检测结核分枝杆菌.pdfVIP

· 80 · JournalofClinicalandExperimentalMedicineVo1．7，No．11 Nov．2008 噬菌体生物扩增法结合荧光染色法 快速检测结核分枝杆菌 夏洪娇 刘剑荣 彭可君 陈华 良(萍乡市人民医院检验科 江西 萍乡 337055) 【摘要】 目的 通过用噬菌体生物扩增法(PhaB)结合荧光染色法检测51例标本中的结核分枝杆菌，与抗酸染色和x线 比较，来探讨此检测方法的临床价值。方法 标本来源于门诊和住院病人，将每例标本进行噬菌体生物扩增法检测，并涂 片进行抗酸染色法、结核杆菌荧光染色法检测，并与x线诊断结果和最后临床诊断进行比较，数据采用x统计分析。结果 噬菌体生物扩增法检出阳性率与x线检查阳性检出相符率、临床最后诊断相符率分别达95．0％和96．55％，诊断比较差 异无显著性(P0．75)。而用单纯的抗酸染色法检查，相符率分别只达45．0％和62．07％，差异有显著性。结论 采用噬 菌体生物扩增法结合荧光染色法较单纯的抗酸染色法检查结核分枝杆菌阳性检 出率和与临床最后诊断相符率显著增高， 是一种敏感性高，特异性强，快速、简便和无创的检测方法，对防止漏诊，病情观察、疗效判断为临床提供了可靠的依据。 【关键词】 噬茵体生物扩增法 荧光染色法 抗酸染色 x线 结核分枝杆菌 我国是全球22个结核病高负担国家之一，目前在我国是否 均高，29例阳性病例中有 11例抗酸染色法 阴性，而用噬菌体 给予抗结核治疗取决于涂片、临床和放射线表现，但涂片查抗酸 PhaB法结合荧光染色法仅有 1例未检出；结核杆菌荧光染色法 杆菌虽有较高的特异性但缺乏敏感性 (涂片中抗酸杆菌要达 阳性检出率较噬菌体低 ，但较单纯的抗酸染色高，其中3例为尿 到10条／ml才可检出阳性)J、结核杆菌的培养(LJ培养)存 液标本，可能受制片质量的影响所致。见表 1。 在操作复杂、耗时长等缺陷 ，临床上没有或无法依据结核杆菌 表 l 三种方法检查的结果 的培养来进行治疗。因此，有大量涂片阴性的活动性结核病例被 漏检。本文运用噬菌体生物扩增法(PhaB)结合荧光染色法快速 检测标本中的结核杆菌，现报告如下。 1 资料与方法 1．1 一般资料 病例资料源于2007年我院门诊和住院病人，共 采集了51例病人的痰液、胸水、腹水、尿、脑脊液等标本 ，其中男 性31例，女性20例，平均年龄48．78岁。 2．2 三种方法检测结果与x线和临床最后诊断符合率 噬菌 1．2 试剂 由上海金浩科技有限公司提供英 国进 口FAST— 体生物扩增法阳性检出率与x线检查阳性检出相符率达95．0％ PlaqueTBTM一结核分枝杆菌快速诊断试剂盒；武汉金宏提供的 (19／20)，差异无显著性 (P0．75)；而用单纯的抗酸染色法检 台湾贝索结核杆菌染色液(荧光法)。 查，阳性相符率只达45．O％(9／20)，差异有显著性 (P 0．O1)； 1．3 方法 采用噬菌体生物扩增法结合荧光染色法较单纯的抗酸染色法检 1．3．1 原理 结核分枝杆菌噬菌体只能感染活的结核分枝杆 查阳性率提高了50．0％。 菌。在待检标本中加入特异性结核分枝杆菌噬菌体，随后经历杀 在阳性病例 中，噬菌体 PhaB法与临床最后诊断相符率达 毒、复制、MTB细胞壁破裂、再感染、复制和裂解的循环过程，在 96．55％(28／29)，差异无显著性 (P0．75)；而单纯用抗酸染 培养皿上的敏感细胞生长区域出现清晰可见的噬菌体空斑 ，平皿 色与临床最后诊断相符率为62．07％(18／29)，诊断差异有显著 中噬菌斑数 目与标本中活的MTB数 目呈正相关。 性 (P0．05)；噬菌体 PhaB法结合荧光染色法结果与临床最 1．3．2 检测方法 采用标本进行噬菌体生物扩增法检测，并涂 后诊断相符率高于单纯的抗酸染色法34．48％。见表2、表3。 片进行抗酸染色法、结核杆菌荧光染色法检测，并与x线诊断结 表2 三种方法检测结果与X线和临床最后诊断比较 (例) 果和最后临床诊断进行比较、分析。 1．3．3 标本处理 按常规先制片4块，分别做结核杆菌荧光染 色和抗酸染色检查，然后将剩余的标本进行消化和去污染处理 ， 以备PhaB检测。制备阴、阳性对照，并依次按操作规程进行标本 中噬菌体生物扩增，于37qE