一种发根农杆菌介导的大豆“组合”植株的高效创建方法与利用.pdfVIP

江西农业学报 2013，25(10)：20—22 ActaAgriculturaeJiangxi 一 种发根农杆菌介导的大豆 “组合植株的 高效创建方法与利用 何晓兰，张大勇，易金鑫，徐照龙，刘晓庆，许玲，黄益宏 (江苏省农业生物学重点实验室、江苏省农业科学院农业生物技术研究所，江苏 南京210014) 摘 要：利用微型注射器注射含发根性Ri质粒载体的发根农杆菌K599茵液于大豆幼苗子叶节部位，然后在光照培养 箱中培养，发根率高达90％，PCR检测阳性率高达 100％；随后剪掉原有的根系，在营养液中培养成根部足够健壮的大豆 “组合”植株 ；初步分析了大豆一个ERF蛋白基因的抗、耐旱功能。本方法快速、简单、高效，为后续的大豆功能基 因组学研 究提供 了重要的实验体系。 关键词：发根农杆菌；注射；大豆；子叶节；组合植株 中图分类号：$565．1 文献标志码：A 文章编号：1001—8581(2013)10—0020—03 A High-—effi cientM ethodforCreationofCompositeSoybeanPlantsM ediated byAgrobacterium rhizogenesandItsApplication HEXiao—lan，ZHANGDa—yong，YIJin—xin，XUZhao—long，LIUXiao—qing，XULing，HUANGYi—hong (KeyLaboratoryofAgriculturalBiologyofJiangsuProvince；InstituteofAgricuhuralBiotechnology， JiangsuAcademyofAgriculturalSciences，Nanjing210014，China) Abstract：ThecotyledonarynodeofsoybeanseedlingswasinjectedbythesolutionofAgrobacteriumrhizogenesstrainK599with rootingRiplasmidvectorthroughusingmicro—syringe，thentheywereculturedinilluminationincubator．Theirrootingratiowasup to90％ ．andthepositiveratioreached100％ byPCR detection．Hereafter，theiroriginalrootsystem wascutoff，andtheywere cultivatedtobecomecompositesoybeanplantswithstrongenoughrootsinnutrientsolution．Thedrought—resistantanddrought— tolerantfunctionsofERFproteingeneinsoybeanwereprimitivelyanalyzed．Thismethodwasfast，simpleandhighlyeffective，and itprovidedanimportantexperimentalsystem forsubsequentsoybeanfunctionalgenomicsstudies． Keywords：Agrobacteriumrhizogenes；Injection；Soybean；Cotyledonarynode；Compositeplants 发根农杆菌 (Agrobacteriumrhizogenes)是根瘤菌科 株，如百脉根 ；利用组装转基因植物可以进行分子生 农杆菌属的一种革兰 氏阴性土壤细菌，可诱导植物形 物学、土壤移栽与水培以及启动子分析与亚细胞定位 成毛状根(具有生长快、分枝多及失去向地性的特点)； 研究；利用组合植物体系可以进行 RNAi基因功能分 发根农杆菌在 自然界中的宿主仅局限于少量植物，如 析，如沉默根部 Su基因对野生地上部基因表达的影 苹果、黄瓜、烟草及柠檬等。在实验室条件下，发根农 响 ；还可以进行植物与生物以及非生物间的互作研 杆菌可侵染450种