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稻瘟病菌株接种剂制作及致病效果探究【摘要】本文阐述了稻瘟病菌株接种剂的制作及致病效果研究。 【关键词】菌株；温度；生长量；致病效果 【中图分类号】TU987【文献标识码】A【文章编号】1674-3954（2011）02-0192-01 一、菌株最佳培养基确定： 将病原菌株分别接种于PDA培养基、PSA培养基、稻瘟病分离培养基，测定并比较菌丝体干重，确定最佳培养基。 不同培养基条件下稻瘟病菌丝体干重测定结果(单位：g／250ml) 最佳培养基如图表1所示，三种培养基中，最佳的培养基是PSA培养基。三种培养基在相同的培养条件下，稻瘟菌在PSA培养基上产生的菌丝体最多，达到5.2874g／250ml。说明稻瘟病原菌的生长，需要含有糖类的物质为其提供碳元素，但如果加入一些其它的营养元素，可以促进稻瘟病原菌的生长 因为稻瘟病分离培养基中只能够为菌株碳源，而马铃薯中营养丰富，不仅含有淀粉，蛋白质，脂肪等提供碳源，氮源的物质，而且VB、VC、钙、镁、钾等微量元素也都应有尽有，能充分促进菌株生长，所以分离培养基上的稻瘟病原菌生长相对缓慢，菌丝体干重测定结果最少。 二、最佳培养温度的确定： 利用PSA培养基，对稻瘟病菌株进行培养，分别于20℃、14℃、28℃、30℃、32℃，培养6d测定并比较菌丝体干重，确定最佳培养温度。 不同培养温度条件下稻瘟病菌丝体干重测定结果(单位：g／250ml) 由图表2可知，在不同温度下病原生长明显不同。在24℃和28℃对应着试验数据中最大的两个数值，24℃之前，温度越高，对稻瘟病原菌菌丝体的生长越有利；28℃之后，在越高的温度下培养病原菌，其菌丝体的生长越不好。所以对稻瘟病原菌的培养，适宜的温度范围是 24-28℃ 三、病原菌株生长量测定： 稻瘟病菌丝体干重测定结果(单位：g／ 250ml) 由此表3可知，稻瘟菌培养到第7天时，所对应的菌丝体的干重的数值是最大的。在培养的前3天，稻瘟菌株处于适应期，菌体增殖的数量很小或者不增加。第3天过后。菌体增殖进入了对数期，菌丝体干重急剧增加，所以此期间菌丝体的干重变化很大。第7天后，由于培养基内营养物质的逐渐减少和有害代谢产物的不断积累，菌体的繁殖进入了稳定期间。所以菌丝体的干重不再增加，甚至还少量减少。所以为了获得大量菌丝体来产生分生孢子，而进行的稻瘟菌株的培养的培养时间最好在7-9天之间 四、接种剂的制作及致病效果研究 1、接种剂的制备： 制备了液体接种剂 纯菌接种剂为配备成的稻瘟病原菌孢子浓度为2．17 x 105个／ml的孢子悬浮液 混菌接种剂为配备成的稻瘟病原菌孢子浓度为2．25 x 105个／ml的孢子悬浮液 2、接种试验效果： 使用纯菌制成的液体接种剂对10个水稻品种进行感病接种。东农415和牡丹江22号的抗性类型都为R(抗性)，但这两个水稻品种喷雾接种后，发病的平均病情分别为1．3级和 1．1级。抗性类型被判断为HR(高抗)。其余的水稻品种的抗性类型根据平均病情判断，没有发生变化。此接种剂对水稻品种抗性的鉴定符合程度达到了80％，而且平均病情1．3级的判定可能还包含着一定的观察误差，符合程度可能还要高一些。说明了液体接种剂的有效性与准确性。所以，此液体接种剂可以应用于水稻感病的试验中。 五、讨论： 1、道瘟病菌的分离： 稻瘟病菌的分离通常使用单孢分离方法。因为稻瘟病菌在培养基上生长缓慢，所以杂菌容易占优势。从病斑上进行组织分离特别困难，而在病斑上形成孢子后再分离孢子则比较容易。在采集到叶，穗等罹病标本时，为不使叶片打卷并尽快干燥，采集后要放在冰箱中保存，并要尽快分离。在高温时杂菌将因为高温高湿而大量繁殖，致使分离不易成功。 2、稻瘟病原菌产孢培养： 在稻瘟菌感病等实验中都需要其产生大量的孢子，利用马铃薯琼脂培养基，孢子形成数量少，所以一般稻瘟菌产孢都使用燕麦培养基，置于光照下培养24h是为了使孢子的成熟度整齐一致。如果孢子的成熟度不同的话，所形成的病斑中易混生R―S型从而难以判断。但从多年的实验经验得知，对于一般的病菌生理小种鉴定和水稻品种抗性分析，用米糠培养基培养的孢子量就足以待用。多年养的菌株范围很广，一些在传统大麦粒培养基上产孢效果很差的菌株，在米糠培养基上也可得到满意的产孢效果。与燕麦片培养基相比，在培养过程中米糠培养基较不易被污染，而且米糠价格低，培养基制作过程简单。因此，米糠培养基是实验室条件下大量培养稻瘟菌分生孢子的首选培养基。 3、喷雾接种注意事项： 有些菌株产生孢子少，达不到接种孢子的最少要求浓度时，就按最少浓度接种，但要求标明记录。 当恒温恒湿接种设备条件受限制时，可