脉冲安培检测法测定b 型流感嗜血杆菌结合疫苗 - ingenta connect.pdfVIP

·1804· 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2016,36(10) 高效阴离子交换色谱- 脉冲安培检测法测定b 型流感 嗜血杆菌结合疫苗多糖及游离多糖的含量* ** ， ， ， ， ， ， 唐静 赵丹 李红 李亚南 李茂光 陈翠萍 叶强 （中国食品药品检定研究院呼吸道细菌疫苗室，卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京100050 ） 摘要　目的：建立高效阴离子交换色谱- 脉冲安培检测法（HPAEC-PAD ）测定b 型流感嗜血杆菌（Hib ） 结合疫苗的多糖及游离多糖含量。方法：将疫苗中的有效抗原成分—Hib 多糖，其结构为多聚磷酸核糖 基核糖醇（polyribosylribitol phosphate ，PRP ），用6 mol ·L-1 盐酸进行水解，得到其核糖醇（ribitol ）单体； 使用CarboPac® MA1 阴离子交换柱（4 mm ×250 mm ），以580 mmol ·L-1 氢氧化钠溶液为流动相，流速为 0.4 mL ·min-1 ，柱温35 ℃，进样体积100 μL ，脉冲安培检测器收集信号，核糖醇的含量以峰面积计算得到， 再根据核糖醇占PRP 干重的质量分数（41.3% ），计算出Hib 结合疫苗中PRP 及游离多糖（Free PRP ）的含 量，并评估该方法的重复性和再现性。结果：核糖醇质量浓度在0.075~1.05 μg ·mL-1 范围内，与峰面积响 应值呈良好的线性关系（ =0.999 9 ），最低检测限为2.5 ng ·mL-1 ；标准品供试溶液连续进样6 次，峰面积及 r 保留时间的RSD 均小于5% ；核糖醇加标回收率在80% ～120% 之间；对来自5 个企业的4 个不同批次的 Hib 结合疫苗的PRP 及Free PRP 含量进行测定，结果均符合规定。结论：本方法在测定Hib 结合疫苗的 PRP 及Free PRP 含量时，样品前处理简单，分离效果好，且灵敏度高，结果稳定，可靠，对控制该疫苗的质量 具有重要意义。 关键词：b 型流感嗜血杆菌结合疫苗；多聚磷酸核糖基核糖醇；核糖醇；阴离子交换色谱；脉冲安培检测 中图分类号：R 917　　　文献标识码：A　　　文章编号：0254-1793 （2016 ）10-1804-06 doi ：10.16155/j.0254-1793.2016.10.14 Determination of polysaccharide and free polysaccharide contents of Haemophilus influenzae type b conjugate vaccine by high performance * anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection ** TANG Jing ，ZHAO Dan ，LI Hong ，LI Ya-nan ，LI Mao-guang ，CHEN Cui-ping ，YE Qiang （Key Laboratory for Quality Control Method and Standardization of Biotechnical Products ， National Institutes for Food and Drug Control