归肝经中药作用于人肝癌细胞差异表达蛋白酪氨酸激酶的筛选与分析.pdfVIP

中国中西医结合急救杂志 20 15 年 5 月第 22 卷第 3 期 Chin J TCM WM Crit Care ，May 20 15 ，Vol.22 ，No.3 · 227 · ·论著 · 归肝经 中药作用于人肝癌细胞差异表达 蛋 白酪氨酸激酶的筛选与分析 1a 1b 2 1c 1a 1b （1. 湖南 中医药大学 a 中西医结合学院， b 研究生学院， c 药学院，湖南 长沙 4 10208 ； 2. 湖南 中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 4 10007 ） 【 】 摘要 目的 应用蛋 白芯片技术筛选归肝经 中药作用于人肝癌细胞蛋 白酪氨酸激酶 （PTKs ）系统 的特 征性差异表达蛋 白，并分析不 同归肝经 中药与 PTKs 调节 的差异性 。方法 选择 40 只 BALB/C 裸小 鼠，采用将 皮下瘤组织块植入肝左叶实质 内的方法复制原位移植瘤模型 ，模型复制 10 d 确定成瘤后分为 4 组 ，各组分别腹 腔注射相应 的中药提取物 ，归肝经化瘀消癥药对组给予三棱和莪术 （给药量为含生药 4.5 g ·kg-1 ·d-1 ）、归肝经 攻毒散结药对组给予蜈蚣和全蝎 （给药量为含生药 0.3 g ·kg-1 ·d-1 ）、归脾经对照药对组给予黄芪和 白术 （给药 量为含生药 6.3 g ·kg-1 ·d-1 ），模型组腹腔注射等量 0.9% 生理盐水 。药物处理 3 周后处死小 鼠取肝癌组织 ，采用 蛋 白芯片技术筛选归肝经药对作用于肝癌细胞 的差异表达 PTKs 并进行聚类分析 。结果 实验结束后各组动 物数分别为化瘀消癥药对组 6 只 ，攻毒散结药对组 5 只 ，对照药对组 5 只 ，模型组 7 只。蛋 白芯片筛选结果显示 ： 以调节倍数大于 1.50 或小于 0.67 判定为差异有统计学意义 ，与模型组 比较 ，化瘀消癥药对组 42 种表达均为上 调 〔包括 29 种受体酪氨酸激酶 （RTKs ）和 13 种非受体酪氨酸激酶 （nrPTKs ）〕，其 中调节倍数大于 5.0 的有促红 细胞生成素产生肝细胞受体 B1 （EphB1）、表皮生长因子受体 （ErbB2、ErbB4 ）等 3 种 RTKs ；调节倍数为 3.0 ～5.0 的包含 7 种 RTKs ，分别为 EphA 1、EphA3、EphA7 、成纤维细胞生长 因子受体 2- α（FGFR2- α）、肝细胞生长 因 子受体 （HGFR ）、巨噬细胞集落刺激 因子受体 （M-CSFR ）、血管 内皮细胞生长 因子 2 （VEGFR2 ）；2 种 nrPTKs 分 别为非受体酪氨酸激酶 BMX （BMX ）、Janus 激酶 （JAK1）。攻毒散结药对组表达上调 23 种 （RTKs 15 种 、nrPTKs 8 种 ），6 种下调 ，其 中调节倍数为 3.0 ～5.0 的 RTKs 分别为 ErbB4 、M-CSFR ，1 种 nrPTKs 为巨核细胞相关酪氨 酸激酶 （MATK ）。对照药对组表达上调 28 种 ，下调 8 种 。聚类分析结果显示 ，符合筛选条件 的 PTKs 差异表达 在化瘀消癥药对组有 17 种 ，其 中 9 种 RTKs 〔受体酪氨酸激酶样孤儿受体 （ROR2 ）、干细胞 因子受体 （SCFR ）、间 变性淋 巴瘤激酶 （AL