小球藻的分离及其DNA提取方法的研究.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2008。36(32)：13970—13971 责任编辑 段永波 责任校对 昊晓燕 小球藻的分离及其DNA提取方法的研究 任雪艳，孔庆军，王恒强，占东霞，张海黎 (石河子大学生命科学学院，新疆石河子832003) 摘要 [目的]从湖水中分离小球藻并提取其DNA。[方法]采用稀释法及水滴法分离小球藻，优化小球藻培养条件 ，并用改良CTAB法 及SDS法提取其DNA。[结果]温度20～25℃、光照4．39～5．86W／m。及转速 100～150r／min的条~i$ff-小球藻的培养；改良CTAB法 适于提取小球藻DNA。[结论]该研究将有助于在分子水平研究小球藻，促进小球藻的开发和利用。 关键词 小球藻：分离方法；DNA提取 ：改 良CTAB法 中图分类号 Q949．2 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2008)32—13970一o2 bolationofC zDrellavulga~sandItsDNA ExtractionM ethods RENXue-yanetal (CollegeofLifeSciences．ShiheziUniversity，Shihezi，Xinjiang832003) Abstract O『bjective1T}1eaimofthisstudyistoisolateChlorellavulgaris(chlorella)andextractitsgenomicDNA．1MethodIBoththedilu— tionmethodanddripmethodwereemp1oyedtoisolatechlorellafrom lakewatersamples；theconditionsforculturingchlorellawereoptimizedand itsgenomicDNAwasextractedbyimprovedCTABmethodandSDSmethod．1ResultlTheproperconditionsforchlorellaculturewereasfollow— ing：temperature20—25℃ ．illumination4．39—5．86W／m androtationalspeed100一l50r／min；improvedCTABmethodwassuitableofrex— tractinggenomicDNAfromehlorella．『Conclusion1rlheresultishelpfulofrstudyingthechlorellaatmolecularlevelandpromotetheexploitation andutilizationofchlorellaresources． Keywords Chlorellavulgar~：Isolationmethod：DNA extraction：ImprovedCTABmethod 小球藻是一种真核单细胞藻类，也是第一种被人工培养 1．3 小球藻的分离 采回水样后 ，进行显微镜检查 ，如果发 的微藻，具有极其丰富均衡的营养成分和优 良的医疗保健作 现有需要分离的藻类，且这种藻类在水样中数量较多时，可 用 ，并被广泛应用于污水处理…以及保健食品、水产养殖饵 立即进行分离；若数量很少，分离困难时，可先进行预培养， 料 、畜牧饲料添加剂的生产等方面 J，被誉为 “药物藻类 ”。 待数量增多后，再采用如下方法进行分离。① 稀释分离法： 近年来，随着藻类生物技术的迅速崛起，因结构简单、生长迅 在无菌操作的条件下，对待分离的样 品采用逐步稀释的方 速 、营养丰富，又可食用 ，因而小球藻已被作为生物反应器生 法 ，边稀释边在显微镜下镜检，直到视野中每滴样 品只含 1 产药物 。但 由于小球藻细胞壁 的组分和结构较为特 个细胞时，即停止稀释，开始分接培养。② 水滴分离法：在 殊 。。，给小球藻 DNA的提取带来一定困难 ，从而影响了小 无菌操作的条件下，把要分离的藻样用微吸管在玻片上滴成 球藻基因工程研究的深入。因此 ，该研究对蘑菇湖小球藻进 大小合适的小水滴，镜检水滴中只有 1个要分离的单种，即 行分离并探索适合的DNA提取方