香樟（Cinnamomum camphora）果实酪氨酸酶的分离纯化及特性分析.pdfVIP

安徽农业科学，Journal ofAnhui A ．Sci．2008，36(15)：6167～6170，6262 责任编辑 罗芸 责任校对 李洪 香樟(Cinnamomum camphora)果实酪氨酸酶的分离纯化及特性分析 张晓晴 ，蔡宇杰 ，廖祥儒 ，张大兵2 (1．江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡214122；2．江苏汉邦科技有限公司，江苏淮安223001) 摘要 [目的]检测并分离香樟果实中的酪氨酸酶。[方法]从香樟成熟果实中分离和纯化出酪氨酸酶，研究该酶的酶活、蛋白质含量、最 适DH值、最适温度、动力学特性和稳定性，并分析了不同金属离子、化合物和中药对其酶活的影响。[结果]经分离和纯化，获得43 kI)的 酪氨酸酶。该酶的最适DH值和最适温度分别为7．5和50℃。以L-DOPA为底物，测得Km和vnm分别为12．83 mmol／L和180．65 U／rag。该酶在pH值4～7和较高温度时均较为稳定。 和cu2 对该酶活性具有抑制作用，而Zn2 、M 等则有激活作用。25o mmol／LFA)TA对该酶有激活作用，抗坏血酸和1 mmol／L 巯基乙醇有完全抑制作用。中药女贞对其有强激活作用，乌梅对其抑制作用 最明显。[结论]香樟果实中酪氨酸酶同工酶的存在为该酶的纯化带来一定难度。 关键词 酪氨酸酶；纯化；香樟；性质 中图分类号 Q55 文献标识码 A 文章编号 O517—6611(2008)15—06167一o4 Selmration and Purification of Tyrosinase from the Fruits of Cinnamolnum camphora and its Characteristics Analysis 2H· NGXiao-qing etal (KeyLaboratory ofIndustrialBiotechnology ofEducationMinistry，Biotechnology College of JiangnanUniversity，Wu)d，Jiang— su 214122) Absmaa 『Objective]The research aimed to detect and separate tyrosinase in the fruits of Cinnamomum camphora．[Method]Tyrosinase was sepm-ated and purified from mature fruits of C．carr~hora to study its activity，protein content，the optirr~mpH value，the optimum temperature，dy~mic eharac— teristiesand stability．Andthe effects ofdifferentmetalions，eorr~poundsandtraditional 0linesemedicine onthe enzylne activityweIe analyzed，lResultJ ah~ough separation and purification．tyrosinase with the size of43 kD was obtained． e optimum pH value and the optimum temperature ofthis enzy／l~ were 7．5 and 50℃ resp．Wi山L-DOPA as sabstrate．Km and Vrozx were determined as 12．83 rrcnol／L and 180．65 U／rag resp．The e／1zyr／~was ／nol~ stable both at pH value of4～7 and under higher temperature．Both Ar and Cu had inhibition on the enzyll~activity，while “，M and so on had the activation effects on it．250 mmol／L EDTA had all activation effect on山is enzylne activity，while ascorbic aeid and 1 mmol／L mercaptoethanol