向日葵BADH基因部分序列的克隆与分析.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2008。36(32)：14003—14004 责任编辑 张杨林 责任校对 李洪 向日葵BADH基因部分序列的克隆与分析 易乐飞，王萍，周向红 (淮海工学院海洋学院，江苏连云港222005) 摘要 [目的]为进一步利用向日葵BADH基因提供理论和实践依据。[方法]以电子克隆技术为基础 ，通过RT-PCR获取向日葵BADH 基因的部分序列，并进行测序。[结果]通过RT—PCR获得 了一段基 因序列。该PCR产物经1．0％琼脂糖凝胶电泳呈现出一条长为1584 bp左右的特异性条带，与预期设计的1581bp的扩增片段相符 ；与电子克隆得到的相应序列比对结果表明，两者一致性高达99．22％。 其编码蛋白含有与酶功能密切相关的保守氨基酸序列，与其他物种的BADH具有较高的一致性。[结论]成功克隆了向日葵BADH基因 的部分序列。 关键词 向 日葵；甜菜碱醛脱氢酶；BADH基 因：基因克隆 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 o517—661l(2008)32—14003—02 CloningandAnalysisofBADH Genefrom HeIinnmusannuus YILe-feietal (SchoolofMarineScience＆Technology，HuaihaiInstituteofTechnology，Lianyungang，Jiangsu222005) Abstract 10biectivelTheresearchwastoprovidethetheoryandpracticalbasisfortheutilizationofBADH GenefromHelianthusannuus． fMethodlPartialsequenceofsunflowerBADHcDNAwasobtainedbythereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT—PCR)withsili— cocloningtechnique．[Results]ThepartialgenesequencewasobtainedwithRT—PcR．1l1ePCRproductionwaselectrophoresedin1．0％aga— rosegel，andaspecificbandofabout1584bplengthwasobserved，whichsizewassimilartodesignedsize．Sequencecomparisonofsequen— cingresultrevealed99．22％ nucleotidesequenceidentitywith insilicocloningresult．Protein deducedbysequencingresultcontainedcon— servedaminoacidsresidueandsequencescloselyrelatedtofunctionofenzyme．andpossessedhighaminoacidsequenceidentitywithBADH ofrmotherorganism．1ConclusionlThepartialsumqowerBADHgenesequencewassuccessfullycloned． Keywords Sunflower；BADH：删 D日gene；Cloning 植物为了抗高盐环境，维持渗透平衡和体内水分，会在 增片段长 1581bp，且包含向 日葵甜菜碱醛脱氢酶基因的完 细胞内主动积累一些小分子有机化合物，如多元醇类 、糖类、 整 ORF。上游引物 ：5AAGTTGcTcGCTAcArITI’c3；下游引 氨基酸及其衍生物等。其 中甘氨酸甜菜碱被认为是最好的 物 ：5GTGCCAAACGGTACAGAC3。 渗透调节剂，除了参与细胞的渗透调节外，还具有在渗透胁 1．2．3 第一链cDNA的合成。取2 g提取的总RNA，以0l— 迫条件下稳定生物大分子结构和功能的作用，因此参与甜菜 igo(dT)为引物，用 BBI的第一链 cDNA合成试剂盒 ，按说明 碱生物合成的甜菜碱醛脱氢酶(Betainealdehydedehydrogen． 书的反应条件合成单链 cDNAo ase，BAD