链亲和素 - science china press.pdfVIP

中国科学 B 辑 化学 2006, 36 (4): 353~360 353 链亲和素-磁性微粒的制备及其应用* ① ① ① ② ② ①②∗∗ ①∗∗ 张志锋 朱宏莉 唐一通 崔 婷 耿婷婷 陈 超 崔亚丽 (① 西北大学生物芯片研发中心暨国家微检测系统工程技术研究中心, 西安 710069; ② 陕西西大北美基因股份有限公司, 西安 710069) 摘要 通过物理吸附和共价作用机制, 制备两种链亲和素-磁性微粒, 即链亲和素-金磁微粒和 链亲和素-氨基磁粒, 并对其在不同缓冲液中的稳定性进行研究; 采用酶抑制法测定两种链亲和 素-磁性微粒对游离生物素的结合能力; 分别以紫外吸收和固相核酸杂交方法, 测定两种链亲和 素- 磁性微粒对生物素标记寡核苷酸探针的固定化容量及活性, 并与 Dynabeads®M-270 Streptavidin 进行比较. 结果表明: 通过物理吸附作用制备的链亲和素-金磁微粒, 适用于核酸杂 交与检测常用的STE (Tris-NaCl-EDTA) 缓冲系统, 通过共价作用形成的链亲和素-氨基磁粒, 适 用于STE 和磷酸盐(PBS)缓冲系统; 1 mg 链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒对游离生物素 的最大结合容量分别为4950 和5115 pmol; 对生物素标记寡核苷酸探针(24 mer) 的结合容量分别 为2839 和2978 pmol, 测定结果均是Dynabeads®M-270 Streptavidin 的6~7 倍; 与FITC-标记互补 寡核苷酸的杂交结果表明, 固定于链亲和素-磁性微粒表面的寡核苷酸探针保持了较好的生物学 活性. 关键词 链亲和素 磁性微粒 制备 应用 来源于链霉菌(Streptomyces Avidinii)或基因重组 在免疫分析、核酸杂交检测、药物筛选等领域得到了 技术制备的链亲和素具有 4 个相同的亚基, 每个亚基 广泛的应用 [4~6]. 该系统与固相载体的结合应用, 更 含有一个与生物素结合的位点, 生物素与链亲和素的 是具有潜在的发展前景 [7], 以目前常见的ELISA检测 亲和结合能力在溶液中可达到 2.5 × 1013 (mol/L)−1 [1,2], 为例, 抗体(抗原)在酶标板孔的直接包被会损失其大 甚至是抗原抗体亲和力的 100 万倍 [3]. 通过生物素刊 部分生物学活性, 有时甚至高达 90%[8], 但将生物素 噻吩环侧链戊酸的羧基可将蛋白质、氨基标记DNA 化抗体(抗原)通过包被在酶标板孔的链亲和素固定在 等生物分子与其共价偶联, 因此, 生物素- 链亲和