蛋白质组学样品制备猴血浆多个高丰度蛋白的去除应用 - agilent.pdfVIP

蛋白质组学样品制备 猴血浆多个高丰度蛋白的去除 应用 蛋白质组学 作者 前言 Nelson Guerreiro and Stephane Charmont 血浆中含有来自许多组织和生理过程中丰富的分子， Novartis Pharma AG 这些有可能成为生理状态的标示物。目前在药物开发 BioMarker Development CH 4002 Basel, Switzerland 和风险评估中，对血浆生物标志物的发现和应用越来 越受到重视。血浆的非伤害性采集尤其有利于对临床 摘要 治疗的监测。迅速发展的蛋白质组技术，正在被用于 描绘与治疗或疾病相关的血浆蛋白质组的动态变化。 血浆蛋白质组包含了高度复杂阵列的蛋白质，蕴藏着丰富的潜 然而，血浆中最高和最低丰度蛋白浓度的动态范围在 在诊断和预警标志物。蛋白质组技术在生物标志物研究的应用， 10个数量级以上，使分析非常困难。而且其中还混杂 受到了占总血浆蛋白80%以上几个高丰度蛋白的限制。提高低 着几种高丰度蛋白，如白蛋白和免疫球蛋白，加起来 丰度蛋白的检测灵敏度，关键是能够有效地去除血浆中的高丰 占总血浆蛋白的80%。大量的蛋白质，包括潜在的生 度蛋白。在本研究中，我们使用了安捷伦多重亲和去除系统， 物标志物，只以很低的浓度存在。去除大量的血清蛋 在进行双向凝胶电泳分离之前(2DGE) ，免疫去除猴血浆中的高 白，有助于提高低丰度蛋白的相对含量，以符合各种 丰度目标蛋白。去除了六种高丰度血浆蛋白后，提高了较低丰 蛋白质组平台的动态检测范围。 度蛋白的2DGE检测灵敏度和分辨率。总之，在进行蛋白质组 由安捷伦开发的多重亲和去除系统，能够高特异性地 分离之前，选择性地对血浆蛋白进行有效的免疫去除，能够增 一步从人血浆 血清中同时去除多个高丰度蛋白。多 / 加检测出新的生物标志物的可能性。 重亲和去除系统为一根亲和柱，填充了专门为去除人 白蛋白、转铁蛋白、 、 、结合珠蛋白、抗胰岛 IgG IgA 素设计的免疫亲和纯化多克隆抗体。药物开发和风险 18% T)上进行。按照标准操作程序用SyproRuby®(分 评估中，在用于人之前，要使用各种动物模型进行临 子探针公司, Eugene OR)染色。 床前安全研究，以评价化合物的安全性。从这些动物 模型中，鉴定出生物标志物，作为发生不良反应的提 结果和讨论 示，对处理临床试验病例有较高价值。在本应用报告 使用了 × 安捷伦多重亲和去除柱从猴 中，我们研究了多重亲和去除系统在去除猕猴 4.6 mm 100 mm (macaca fascicularis)血浆中高丰度蛋白的作用。 血浆去除蛋白的典型色谱图见图1A。在同样