铁皮石斛鲨烯合酶基因的克隆及其.pdf

第 41卷 第 9期 西北农林科技大学学报 (自然科学版) Vo1．41 No．9 2013年 9月 JournalofNorthwestA8LFUniversity(Nat．Sci．Ed．) Sep． 2013 网络出版时间 ：2013—08—26 17：53 网络出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／61．1390．S1753．024．html 铁皮石斛鲨烯合酶基因的克隆及其 组织表达模式分析 张 岗 ，唐志书 ，周莉英 ，刘 清 ，李依民 ，张小飞 ，吕 欣。 (1陕西 中医学院 药学 院／陕西省 中药基础与新药研究重点实验室 ，陕西 咸阳 712046； 2西北农林科技大学 食 品科学与工程学院，陕西 杨凌 712100) [摘 要] 【目的】克隆珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛 (DendrobiumofficinaleKimuraetMigo)鲨烯合酶 (Squalenesynthase，SS)基 因(DoSS)，并对其进行生物信息学与组织表达模式分析 ，为研究其生物学功能提供参考 。 【方法】采用RT—PCR和 RACE技术 ，获得DoSS基因全长序列；利用生物信息学软件预测DoSS蛋 白的理化性质、结 构域及亚细胞定位等分子特性 ；用 DNASTAR6．0和 MEGA4．0分别进行 DoSS蛋 白氨基酸多序列 比对和进化关系 分析；借助 qPCR检测 DoSS基因的组织表达模式。 【结果】成功克隆获得铁皮石斛鲨烯合酶基 因，命名为 DoSS (GenBank注册号JX272631)，其 cDNA全长 1735bp，编码一条 由410个氨基酸组成的多肽，分子质量 46．99ku，等 电点 7．13；DoSS蛋 白含有鲨烯 ／]k氢番茄红素合成酶保守结构域 (44—315位氨基酸)；DoSS与其他多种植物 SS基 因的编码蛋 白同源性很高 (61 ～75 )，与水稻、玉米等单子叶植物 的亲缘关系较近 ；DoSS基因为组成型表达 ，在根 中的表达量最大 ，为叶的 12．41倍 ；茎次之 ，为叶的 1．87倍 。 【结论】成功克隆得到 1个鲨烯合酶基 因(DoSS)全长 cDNA；DoSS基因的(在根中高)表达特征暗示 ，其可能在铁皮石斛根的生长发育中发挥重要的调控功能。 [关键词] 铁皮石斛 ；鲨烯合酶 ；基 因克隆；表达模式；结构域 ；萜类 [中图分类号] R931；$567．23 [文献标志码] A [文章编号] 1671—9387(2013)09—0151—08 CharacterjzatlOnofasqualenesynthasegene in Dendrobium officinale KimuraetM igo ZHANG Gang ，TANG Zhi—shu ，ZHOU Li—ying ，LIU Qing ， LIYi—min ，ZHANG Xiao一{ei，LU Xin (1CollegeofPharmacyandShaanxiProvincialKeyLaboratoryforChineseMedicineBasis NewDrugsResearch． ShaanxiUniversityofChineseMedicine，Xianyang，Shaanxi712046，China；2CollegeofFoodScienceandEngineering NorthwestAFUniversity。gangling。Shaanxi712100，China) Abstract：[Objective]Thisstudywascarriedouttocloneasqualenesynthasegene(DoSS)from a medicinally