一种适合稻水象甲双向电泳的蛋白质提取方法 - 生物安全学报.pdf

－ 生物安全学报 ２０１６ꎬ２５(２):１４３ １４７ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＢＩＯＳＡＦＥＴＹ ｈｔｔｐ:∥ｗｗｗ.ｊｂｓｃｎ.ｏｒｇ ＤＯＩ:１０.３９６９/ ｊ.ｉｓｓｎ.２０９５￣１７８７.２０１６.０２.０１１ 一种适合稻水象甲双向电泳的 蛋白质提取方法 １ ２ １ ２ １∗ 杨　 爽 ꎬ尹　 姣 ꎬ张炬红 ꎬ李克斌 ꎬ席景会 １ ２ 吉林大学植物科学学院ꎬ吉林 长春 １３００６２ꎻ 中国农业科学院植物保护研究所ꎬ 植物病虫害生物学国家重点实验室ꎬ北京 １００１９３ 摘要:【背景】蛋白样品制备是２￣ＤＥ蛋白组学研究的关键步骤ꎬ无杂质、高纯度的蛋白样品是获得良好的２￣ＤＥ结果的基 － 础ꎮ 选择合适于昆虫蛋白组学研究的常规蛋白提取方法是２￣ＤＥ研究的前提ꎮ 【方法】通过饱和酚法和ＴＣＡ 丙酮法提取稻 － 水象甲成虫总蛋白ꎬ比较２种方法的优缺点ꎬ以回避昆虫组织蛋白提取时可能出现的问题ꎮ 【结果】ＴＣＡ 丙酮法的蛋白质 －１ －１ 产率(１４.５５ μｇ ｍｇ )显著高于饱和酚法(９.３０ μｇ ｍｇ )ꎬ２种方法获得的ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ条带结果相近ꎬ且高丰度表达蛋白 － － 在ＴＣＡ 丙酮中更高表达ꎻ饱和酚的２￣ＤＥ 图谱蛋白点清晰ꎬＴＣＡ 丙酮法２￣ＤＥ 图谱蛋白点规则但背景模糊ꎬ出现多条横纹ꎮ 【结论与意义】饱和酚法适合稻水象甲成虫蛋白组学的研究ꎮ 这２种方法也能适用于其他昆虫ꎬ但不同的昆虫体内有不同 的干扰组分来干扰蛋白质的提取ꎬ所以获得的蛋白纯度及提取得率可能并不一样ꎮ 试验结果说明了２种蛋白提取方法对 ２￣ＤＥ研究的影响ꎬ并为稻水象甲成虫的蛋白组学研究提供了一定的参考依据ꎮ － 关键词:２￣ＤＥꎻ蛋白提取ꎻ稻水象甲ꎻＴＣＡ 丙酮ꎻ饱和酚 Ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ２￣ＤＥａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｉｃｅ ｗａｔｅｒｗｅｅｖｉｌ １ ２ １ ２ １∗ Ｓｈｕａｎｇ ＹＡＮＧ ꎬＪｉａｏ ＹＩＮ ꎬＪｕ￣ｈｏｎｇ ＺＨＡＮＧ