帕金森病人脑脊液对体外培养的多巴胺能神经元的神经毒性作用以及GSH对这种神经毒性的保护作用的分析.pdfVIP

帕金森病人脑脊液对体外培养的多巴胺能神经元的神经每睦 作用以及GSH对这种神经毒性的保护作用的研究 摘要 CSF：脑脊液、 缩写词PD：帕金森病。sN：黑质DA：多巴胺’ GSH：还原型谷胱甘且太、LDH：乳酸脱氢酶+TH：酪氨酸羟化酶。 disease，PD)是一种发生于中老年的慢性 『【背景】帕金森病(Parkinson’s 神经系统退行性疾病，主要病理变化是黑质(sN)致密部多巴胺(DA)能神经元 变性死亡，纹状体DA减少。其病因和发病机制目前还不是很清楚。已经有 文献报道在PD病人脑脊液(CSF)中可能存在毒性物质对DA能神经元有毒 、 性损害作用ij 【目的】 我们要证实PD病人CSF中是否具有毒性物质特异性地损伤 DA能神经元，并且试用自由基清除剂还原型谷胱甘肽(GsH)来拮抗PD病 人CSF对胎鼠中脑DA能神经元的毒性作用。 ，【方法】 利用DA能神经元的原代细胞培养，通过分析培养上清液中 LDH流出量以及TH免疫组化染色阳性细胞率的变化，来比较加入PD病人 CSF或对照组CSF及不同浓度GSH后，对培养的DA能神经元的影响。 【结果】 l、通过我们建立的培养方法，观察了DA能神经元从接种第lday到l month左右的生长情况，发现细胞生长旺盛，四周光晕明显。7～llday左右 是细胞最丰满、生长最迅速、突起间联系最丰富的阶段。并经酪氨酸羟化酶 (TH)免疫组化染色证明确为DA能神经元，且纯度在90％左右，故此方法培 养的DA能神经元是比较理想的体外实验模型。 2、在体外培养的DA能神经元中分别加入PD病人或正常对照组CSF 后，发现加入PD病人CSF后96hr神经元形态出现损伤性改变：胞膜破坏、 突起皱缩、大量细胞崩解碎裂；培养上清液中LDH流出量较对照组明显增 l 加；TH阳性细胞率较对照组明显减少。表明PD病人CSF对DA能神经元 有毒性损伤作用。 3、加入自由基清除剂GSH可改善PD病人CSF对DA能神经元的损伤 作用，LDH流出量降低，TH阳性细胞率升高，形态学观察也证实了上述结 果。表明GSH可以拮抗PD病人CSF的毒性损伤作用，支持了自由基学说 和氧化应激损伤是PD的重要发病机制。 4、我们的实验还分析了PD病人CSF的神经毒性作用(LDH增长率和TH 的相关关系，但结果未显示出它们之间具有相关性。7 ／ 【结论】PD病人CSF对体外培养的DA能神经元具有特异性的毒性 作用。自由基清除剂GSH可以拮抗这种神经毒性作用。 2 from with the of fluid patients on cerebrospinai Study toxicity and inculture neurons on disease Parkinson’s dopaminergic ofGSH the the toxicity protectionagainst Summary