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克鲁维酵母ARS序列结构与功能研究 中文摘要 克鲁维酵母ARS序列结构与功能研究 目的：通过构建酵母ARS随机突变体库，从中筛选出具有较强的转 化效率的ARS序列，用以构建新型高效的克鲁维酵母基因工程载体。 方法：针对已知ARS序列设计引物，用含有已知ARS序列的质粒 为模板，进行突变PCR反应，得到ARS随机突变体库。将整个突 变体库与酵母的穿梭质粒载体连接，转化大肠杆菌E．coliDH5ct进行 扩增。抽提大肠杆菌转化子质粒并用限制性内切酶初步鉴定重组质 粒。将重组质粒转化宿主克鲁维酵母菌HKY039。同时以不含突变 ARS的载体质粒作为对照，比较转化效率。挑取转化效率明显提高 的酵母转化子，再抽提酵母菌质粒并转化大肠杆菌。抽提大肠杆菌 转化子质粒进行DNA序歹0测定。把经测序证实有突变的质粒再转化 克鲁维酵母菌以进一步验证ARS序列突变与转化效率提高之间的相 关性。 结果：成功地构建出适用于筛选ARS序列的随机突变体库，并从中 筛选出了具有较强转化效率的新ARS序列，进而成功地构建了新型 高效的克鲁维酵母转化载体。 结论：1．首次成功地构建了适用予筛选克鲁维酵母ARS序列的随机 突变体库；2．首次利用突变PCR方法成功筛选出具有较强转化效率 的克鲁维酵母新ARS序列；3．首次研究了克鲁维酵母ARS序列结 构与功能的关系；4．首次成功构建了克鲁维酵母的新型高效转化载 克鲁维酵母ARS序列结构与功能研究 中文摘要 体。本工作为研究ARS序列的结构与功能及DNA复制机制的基础 理论提供了重要实验依据，对于构建新型的酵母高效表达载体具有 重要的意义。 关键词：酵母自主复制序列(ARS)；克鲁维酵母；随机突变体库；突 变PCR。 作 者：杨 虹 指导教师：徐培君，霍克克 II 克鲁维酵母ARS序列结构与功能研究 英文摘要 in ontheARSstructureandfunctionYeast Study Kluyveromyces Abstract thebasisoftherandom libraryofARS，we Objective：On mutagenesis new whichnot have wishtO by ARS only preparationscreening sequence ARS also transformation higheractivity，butdisplayhigher frequency， have in toconstructednew recombinationvectorwhich order gene higher theNonconventional in efficiency yeastexpressionsystem． Methods：We 19uAandthen theA