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ch05DNA体外重组与转移
第五章
基因的体外重组与转移
邢万金
内蒙古大学生命科学学院生物学系
第一节 DNA片段的体外重组
目的DNA
载体
重组载体
目的DNA
载体
重组载体
一、粘性末端（sticky ends）的重组连接
1. 相同的粘性末端直接连接
相同的限制酶、同裂酶、或者同尾酶的末端
（1）两段DNA直接连接
T4DNAT4DNA
连接酶连接酶
5′- G AATTC
-OH P- -3′
3′- CTTAA-P HO-G -5′
（2）DNA插入片段与载体的连接
P
T4DNAT4DNA T4DNAT4DNA -
H 连接酶连接酶 连接酶连接酶 TTAA
O
-
-
O
H
A-P
-
P
A
-OH T
T HO- T 载体
T
A
P-A
重组载体
2. 不同的粘性末端不能直接连接
先处理成平末端
（1）补平
Klenow
DNA聚合酶
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