RbAP46基因转染白血病细胞系的实验研究.pdfVIP

一 一．电穿孑L介导的RbAp46基因稳定转移的白血病细胞系的建立 目的：优化悬浮培养细胞的转染条件，建立RbAp46基因稳定转染的白血病细胞 系。方法：比较了两种电击缓冲液的转染效率，在低电压、高电容的条件下，应 blot分析蛋白质表达水平，挑出表达外源 隆，用PCR检测RbAp46整合，Western 转染的克隆。结论：通过优化转染条件，电穿孔法可将RbAp46基因成功转染悬 浮培养的自血病细胞系，为研究RbAp46基因对白血病细胞的生物学行为奠定基 础。 二．过表达的RbAp46基因在白血病细胞系U937的功能研究 目的：研究过表达的RbAp46基因对白血病细胞系U937生物学特性的影响。方法： 用台盼兰拒染法判定细胞活力，细胞计数判定细胞生长速率。将处在对数生长列 以培养基作为空白对照，培养72小时后收集细胞，流式细胞术测定细胞表面分 分布情况。结果：转染RbAp46的U937细胞的生长速率要比对照组低1倍左右。 分布增加，但是经TPA诱导后，p21mRNA水平的明显增加，细胞阻滞在Gl期。 结论：过表达的外源RbAp46基因能抑制U937的增殖，并为细胞分化准备了条件， 使细胞更易于启动分化，p21可能参与该过程。 · 三．四环素调控的RbAp46基因表达系统的建立 目的：在白血病细胞系U937中建立四环素诱导的RbAp46基因表达系统。方法： 细胞，经G418筛选，产生抗性细胞。用有限稀释法将U937／Tet—On抗性细胞单 克隆化。14天后，克隆逐步形成，在显微镜下标记并移出。再将逆转录病毒 应用荧光紊酶报告基因分析试剂盒检溺荧光素酶的活性。挑选～株低背景和高诱 结果：在U937中建立四环素调控的RbAp46基因表达系统。结论：建立逆转录病 毒楚合的U937细胞株，可用四环素及其衍生物精确调控RbAp46基因的表达，为 研究RbAp46在自血病细胞系的功能提供一种有力的实验手段。 关键词 电穿孔RbAp46基因增殖分化四环素调控基因表达 作 者：段卫明 指导教师：陈子兴教授 Abstract byRbAp46gene line—s—transfected —[—n—．．V．．it．r．o，——s—t．u．d．．y——on．．．t—h．e．．。le——u．k．．e．m．．，i—c—c—e—l—l Abstract celllines ofleukemic characterization and stably 1．Establishment mediated RbAp46 byeleetroporation exogenous expressing conditionsfor ceilsandtoestablish To transfection