（膜电位）荧光测定试剂盒产品 - 上海杰美基因医药科技有限公司.pdf

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10013.4 v.A GENMED 活体组织线粒体内膜功能（膜电位）荧光测定试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 GENMED 活体组织线粒体内膜功能（膜电位）荧光测定试剂是一种旨在通过高度敏感的阳离子荧光羰花青 染料结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化，即内膜电负性的增高或降低，来 分析线粒体内膜功能完整性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。 其适用于各种活体组织线粒体的功能检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老等的研究。产品严格无 菌，即到即用，活体检测，操作简易，性能稳定。 技术背景 阳离子荧光羰花青染色剂JC-1 （5,5,6,6-tetrachloro-1,1,3,3-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide ）是一 种对膜电位高度敏感的染色剂。它特异性地进入线粒体，分布和结合在线粒体基质上。线粒体膜电位的高 低变化决定了JC-1 的分布浓度。电位高，JC-1形成聚集体，而浓度高，荧光显色为红色或桔红色；反之， 则为绿色。荧光减弱表明线粒体内膜功能受到损害。 产品内容 GENMED 清理液（Reagent A ） 毫升 GENMED 染色液（Reagent B ） 微升 GENMED 稀释液（Reagent C ） 毫升 GENMED 裂解液（Reagent D ） 毫升 产品说明书 1份 保存方式 保存 GENMED 清理液（Reagent A ）在4 ℃冰箱里，其余的保存在－20 ℃冰箱里；GENMED 染色液（Reagent B ）避免光照；有效保证 12 月 用户自备 24 孔细胞培养板：用于活体组织线粒体染色的容器 DOUNCE 匀浆器：用于制备组织裂解悬液 微型台式离心机：用于组织成分的制备 培养箱：用于染色孵育 96 孔板或比色皿：用于荧光定量分析的容器 荧光显微镜：用于活体组织细胞线粒体荧光定性分析 荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于活体组织细胞线粒体荧光定量分析 1 实验步骤 实验开始前，将－20 ℃冰箱里的试剂盒中的 GENMED 染色液（Reagent B ）置入冰槽里融化，GENMED 稀释液（Reagent C ）放进 37℃恒温水槽里预热。然后移出 10 微升 GENMED 染色液（Reagent B ）到新 的 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升 GENMED 稀释液（Reagent C ），混匀后，在冰槽里静置，并标记为GENMED 染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。 一、 直接法－荧光显微镜检测 1． 准备 1 个 24 孔细胞培养板 2 ． 放进新鲜切除的动物组织样本（注意：建议组织大小为 0.5 厘米；如果过大，最好刀切处理一下） 3 ． 将组织压平 4 ． 小心加入 xx 毫升 37℃预热的 GENMED 清理液（Reagent A ），清洗组织样本 5 ． 小心抽去清理液 6 ． 小心加入 xx 微升 GENMED 染色工作液，浸没整个组织 7 ． 放进 37℃培养箱，孵育20 分钟，避免光照 8． 小心抽去染色液 9 ． 小心加入 xx 毫升 37℃预热的 GENMED 清理液（Reagent A ），清洗组织样本 10．小心抽去清理液 11．重复实验步骤9 至 10 二次 12．后续切片（100 微米厚） 13．置于载波片上 14．盖上盖玻片，用手指轻轻压平 15．即刻在荧光显微镜或共聚焦显微镜下进行观察（单滤波或双滤波），通过电脑软件分析荧光强度： 观察红色荧光：滤波器激发波长490nm ，散发波长 590nm或罗丹明（rhodamine ）滤波器激发波长540nm， 散发波长 570nm或德州红（Texas Red ）滤波器激发波长590nm，散发波长 610nm――可见