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酵母菌高效破壁方法的革新 ——终极研磨手段：冷冻研磨法 酵母菌是基因表达研究和重组蛋白生产的通用宿主。然而，传 统酶解法进行酵母mRNA 和内容蛋白提取通常非常困难。我们以细胞 总 RNA 提取为例，对各种酵母破壁方法进行比较。我们用不同的方 法对酵母菌破壁，然后用Trizol 试剂进行RNA 的提取，最后进行电泳 检测，发现不同破壁方法效果如下： 破壁方法 破壁操作 结果 评价 蜗牛酶酶解法 取1ml 对数生长期菌液， 没有明显条带，说明 5000rpm 离心去上清， 此法不适用于酵母 留下约100 μl 培养基， 中RNA 提取 混匀。加入蜗牛酶至浓 度为20mg/ml，在37 °C 水浴中酶解90min 泳道1 为提取RNA 泳道2 为Marker 加玻璃珠涡旋 取1ml 对数生长期菌液， 只出现亮度极低的 振荡法 5000rpm 离心去上清， 弥散条带，这说明此 留下约200 μl 培养基， 法不适用于酵母总 加入体积约为 100 μl 的 RNA 提取 玻璃珠，涡旋振荡 10-25min 后，5000rpm 离心5min 泳道 1-4 分别用玻璃珠处 理 10、15、20、25min，5 为Marker 超声波法 取1ml 对数生长期菌液， 能提出完整的总 5000rpm 离心去上清， RNA，但泳道前方有 留下约300 μl 培养基， 明显的弥散条带，说 混匀。然后再冰浴中超 明超声波会打断 声波处理，超声功率 RNA 链形成小分子 200W，工作时间1s，间 RNA。 隔1s 泳道1 样品超声20 次，泳 道2 样品超声10 次，泳道 3Marker 反复冻融法 取1ml 对数生长期菌液， 能较好的破碎酵母 5000rpm 离心去上清， 菌细胞壁，且保证了 留下约100 μl 培养基，