磺胺多残留检测试剂盒 - 深圳同诺生物技术有限公司.doc

磺胺多残留检测试剂盒 使用说明书 【原理及用途】 磺胺类药物（SAs）是应用广泛的抗菌素，对畜禽疾病控制和治疗起到重要作用。但由于磺胺类药物存在严重副作用，人体中长期存在磺胺类药物会导致许多细菌对磺胺类药物产生耐药性，且有潜在的致癌性。我国农业部第235号文件规定其残留限量为100ug/kg,由于高效液相色谱等仪器分析方法样本前处理及测定操作繁琐和费用高，推广使用受到限制。 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测组织、血清、蜂蜜、牛奶等样本中的磺胺类药物（SulfonamideS，SAS），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的磺胺类药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗磺胺类药物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含磺胺类药物含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中磺胺类药物的残留量。 【技术指标】 1、 试剂盒灵敏度：0.5ppb(ng/ml) 2、 反应模式：25℃，45min～15min 3、 检测下限： 组织（高检测限方法）：0.5ppb 组织（低检测限方法）：2.5ppb 血清、尿液：2ppb 蜂蜜：0.5ppb 牛奶：10ppb 4、交叉反应率： 磺胺二甲基嘧啶（SM2）：100% 磺胺间甲氧嘧啶（SMM）：670% 磺胺对甲氧嘧啶（SMD）：582% 磺胺邻二甲氧嘧啶(SDM)：451% 磺胺甲基嘧啶（SM1）：313% 磺胺嘧啶（SD或SDZ）：308% 磺胺二甲异嘧啶(SM2)：241% 磺胺间二甲氧嘧啶(SDM)：175% 磺胺甲噻二唑（SMT）：165% 磺胺氯吡嗪(Esb3)：67% 磺胺噻唑（ST）：58% 磺胺氯哒嗪(SCPA)：58% 磺胺甲氧哒嗪（SMP）：57% 磺胺喹噁啉（SQX）：42% 磺胺异噁唑(SIZ)：18% 磺胺甲噁唑（SMZ）：18% 5、样本回收率： 组织、蜂蜜：95±25% 尿样、牛奶、血清：85±25% 【试剂盒组成】 酶标板：96孔×1块 标准品（绿盖）：各1ml×1瓶（0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb） 高标准品（红盖）：1ppm，1ml×1瓶 抗体工作液（蓝盖）：5.5ml×1瓶 酶标记物（红盖）：5.5ml×1瓶 底物液A（白盖）：6ml×1瓶 底物液B（黑盖）：6ml×1瓶 终止液（黄盖）：6ml×1瓶 20X浓缩洗涤液（透明盖）：40ml×1瓶 2X浓缩复溶液（黄盖）：50ml×1瓶 说明书：1份 【器材和试剂】 1、仪器：酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）； 2、微量移液器：单道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道300μl； 3、试剂：乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、乙腈、Na2HPO4·12H2O、NaOH 、浓HCL 、NaH2PO4·2H2O 【样本前处理】 1、样本处理前须知 实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。实验之前须检查各种实验器具是否干净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。 2、溶液配制 0.2M氢氧化钠溶液：称取0.8g氢氧化钠用去离子水溶解至100ml； 0.02M PB缓冲液配制：称取2.58g Na2HPO4·12H2O和0.44g NaH2PO4·2H2O加去离子水500ml溶解； 0.5M盐酸溶液配制：量取4.3ml浓盐酸加入去离子水定容至100ml混匀； 乙腈-二氯甲烷混合液配制：乙腈与二氯甲烷按1:4比例混匀； 样本复溶液：2×复溶液使用前用去离子水按1：1稀释。 3、样本前处理步骤 3.1 组织样本（高检测限）处理方法一 称取2±0.05g均质组织样本置离心管中，加入8ml乙腈-二氯甲烷混合液，振荡2min，15℃4000r/min以上离心10min； 移取4ml上层清澈有机相至干燥容器中，在50～60℃氮气或空气吹干； 加入1ml样本复溶液溶解干燥的残留物，加入正己烷1ml。混合30s，15℃4000r/min以上离心5min； 去除上层正己烷，取50μl下层用于分析。 样本稀释倍数：1 3.2 组织样本（高检测限）处理方法二 称取3±0.05g均质组织样本置离心管中，加入3ml 0.02M PB缓冲液充分振荡混匀，再加入4ml乙酸乙酯和2ml乙腈，充分振荡10min，于15℃4000r/min以上速度离心10min； 移取2ml上层液体（约相当于1g的样本）在50～60℃氮气或空气吹干； 加入1ml正己烷溶解干燥的残留物，再加入1ml样本复溶液强烈振荡1min，15℃4000r/min，离心5min； 除去上层正己烷，取下层50μl用于分析。 样本稀释