研究开发成果等报告书.pdf

平成２５年度戦略的基盤技術高度化支援事業 「血液中遊離核酸（miRNA）を用いた癌診断のための核酸抽出キットの開発」 研究開発成果等報告書 平成２６年３月 委託者 近畿経済産業局 委託先 特定非営利活動法人 近畿バイオインダストリー振興会議 目 次 第１章 研究開発の概要 1-1. 研究開発の背景・研究目的及び目標 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 1 1-2. 研究体制 ・･・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 2 （研究組織・管理体制、研究者氏名、協力者） 1-.3. 成果概要 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 5 1-4. 当該研究開発の連絡窓口 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 5 第2 章 本論 2-1. 製品設計 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 6 2-1-1. 構成メンブレンの決定 ･・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 6 2-1-2. プラスチックとS 膜、C 膜の接着方法の確立 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 6 2-1-3. 製品試作と改良 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 6 2-2．血清中遊離核酸DNA、miRNA 抽出の条件最適化 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 7 2-2-1. 様々な抽出液を用いたmiRNA 抽出の検証 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 7 2-2-2. 試薬量の不足による白塊の析出と回避策 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 7 2-3．血漿の保存条件の最適化 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 7 2-3-1. 短期保存検証 ･・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 7 2-3-2. 長期保存検証 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 7 2-3-2. 保存温度検証 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 8 2-4. 診断への応用 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 8 2-4-1. 擬似血清を用いた検証と溶血により影響を受けない内部標準となるmiRNA の検討 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 8 2-4-2. 横紋筋肉種の診断検証 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 10 2-5. より迅速かつ簡便に診断するための検証 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 10 2-5-1. 多項目を同時に診断可能にするプライマーセットの条件最適化 ・・・・・・・・・・・・・ 10 2-5-2. 抽出されたDNA を用いた染色体転座切断点の検出 ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・