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双孢蘑菇不同菌株的RAPD扩增研究.pdf
中国食用菌 2008，27 (6)：41～42，48 EDIBLEFUNGIOFCHINA CN53—1054／Q ISSN1003-8310 双孢蘑菇不同菌株的RAPD扩增研究术 李叶昕，党 永，慕 娟，万 一，贺建超 ，孙晓宇 (陕西省微生物研究所 ， 陕西 西安 710043) 摘要：用 18个随机引物对 3个双孢蘑菇生产菌株进行RAPD扩增，通过计算供试菌株遗传相似 系数及聚类分析 ，构 建供试双孢蘑菇菌株的系统树状 图谱。结果表 明，所用 18个引物 中有8个能对双孢蘑菇菌株扩增 出清晰、稳定的 DNA谱带。供试菌株 2796与F56的相似程度较高，相似系数为0．8571，菌株 2796、F56和菌株 176的平均相似程度 较低 ，平均相似 系数只有0．4728。 关键词：RAPD；双孢蘑菇；聚类分析 中图分类号：$646．1+1 文献标识码 ：A 文章编号：1003—8310 (2008)06—0041—03 双孢蘑菇 fAgaricusbisporus)又称 白蘑菇 、洋蘑菇 ， 表 1供试 随机引物编号及碱基序列 是世界上栽培最为广泛 的食用菌 ，具有重要 的经济价值 。 Tab．1Numbersofrandom primersandnucleotidesequences 2000年 ，世界食用菌的年产量达 250万吨左右 ，其 中双 孢蘑菇占38％以上。然而，有限的高产优质双孢蘑菇菌种 编号 碱基序列 (5’一3’) 编号 碱基序列(5’一3’) 严重地阻碍了双孢蘑菇生产的发展 II-41。 pl TFGCGGCTGA pl0 CTCGGATGTC RAPD (RandomAmplifiedPolymorphicDNA)是采用 p2 ACTGGGCCTC pl1 TCAGTGGCT PCR技术发展起来 的一种 DNA分子标记技术 。因其操作 p3 CTCCGCACAG p12 GGGCCAACA 简洁 、试验成本低 、灵敏度高、通用性强 ，且在不了解物 p4 GGAGCGTACT pl3 CTGAAGCTGG 种基因组相关分子生物学信息下就可进行等优点而被广泛 p5 AGCGGAAGTG p14 GTGGGACCTG 应用。本文利用 RAPD分子标记技术对 陕西微生物所保藏 p6 T]CCCCACCC p15 AAGTGCCTG 并应用于生产的双孢蘑菇菌丝体进行亲缘关系的研究 ，以 p7 CCACCTYCAG p16 TCGGCACCGT 指导下一步的育种生产。 p8 AGGGCGAATG p17 ACACCGTGCC 1 材料和方法 p9 GAAGACCTGG p18 TGCTCGGCTC 1．1 菌株 双孢蘑菇菌株 2796、F56和菌株 176均来 自陕西省微 1．4．2 PCR扩增程序 生物研究所。 94℃预变性 2min，94cC变性 30S，40℃退火 30S， 1．2 DNA提取 72℃延伸 1min．共 42个循环 ，最后 72℃延伸 5rain，降 将保存 的双孢蘑菇菌种转接于 PDA斜面培养基上 ， 至4℃保存备用。 27qC培养 7d～8d，再将活化 的菌丝接入 CYM培养基 中， 1．4．3 PCR产物检测 28℃下边静止边振荡培养5d后 ，收取菌丝 ，加液氮迅速 以DL200
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