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在 Agilent 7100 毛细管电泳系统上采用 实验室自制凝胶缓冲液分析市售单克隆 抗体药物的纯度 应用 生物制药 作者 摘要 窦鹏，孟颖 本实验采用 Agilent 7100 毛细管电泳系统和自制凝胶缓冲液进行市售单克隆抗体药物分 安捷伦科技（中国）有限公司 析。实验结果表明，该方法可以出色的完成对治疗性单克隆抗体药物的非糖基化重链的 分析，且重现性良好。采用该方法可代替商品试剂盒进行单克隆抗体纯度测定，且分析 时间更短，运行成本更低。 前言 实验部分 治疗性单克隆抗体药物是目前生物制药领 仪器 域的热点，相对于小分子药物，单克隆抗 Agilent 7100 毛细管电泳系统，配置 4bar 氮气钢瓶。 体药物的分子结构复杂性更高且更易受生 毛细管（ ： ）：内径： ，总长度： ，有效长度： PN G1600-63211 50 µm 33 cm 24.5 cm 产过程影响，因此对其理化性质进行全面 而系统的解析成为生物制药（尤其是生物 试剂 仿制药）的重中之重。毛细管电泳技术在 表 实验所用试剂列表 1. 单克隆抗体药物表征过程中具有广泛的应 试剂 来源 备注 用，包括抗体的纯度 杂质、等电点、电 / 葡聚糖T-2000 Biosharp 分子量:2000000 (pharmacia 17-0330-01) 荷异质性、糖基化等方面的分析。十二烷 甘油 国药 分析纯 基硫酸钠毛细管电泳法 (CE-SDS) 是中国药 典2015 版附录收载的单克隆抗体药物纯 Trizma Base Sigmaaldrich T-1503 度表征方法，其相对于聚丙烯酰胺凝胶电 硼酸 天津光复 分析纯 泳法 (SDS) 具有更快的分析速度、 EDTA 国药 分析纯 更好的分离度、更优越的重现性和更准确 二硫苏糖醇 Sigmaaldrich 43815 的定量，且更加自动化。CE-SDS 方法能 碘乙酰胺 Sigmaaldrich l-1149 够完成 SDS方法不能完成的针对非 糖基化重链的定量分析。 样品制备 取单克隆抗体药物样品 2 µL 于 200 µL PCR 管中，加入 5µL 500mM DTT （还原电泳）或 目前 方法普遍采用商品化凝胶缓 CE-SDS （非还原电泳）， 。涡旋混匀，在 5 µL 250mM IMA 93 µL 100mM Tris-HC