被导入基因的表达状态可以用pcr、rna印迹.ppt

第 一 节 基 因 诊 断Gene Diagnosis 基因诊断常用技术方法  已知限制酶Mst 1识别序列 （CCTNAGG） CCTGAGG CCTGTGG 突变后不能识别 酶切位点消失，限制酶切片段长度发生变化。 Southern blot 三、基因诊断的应用 遗传疾病 肿瘤 感染性疾病，传染性流行病 判断个体疾病易感性 器官移植组织配型 法医学中个体识别、亲子鉴定 基因检测的现状 目前可以用基因检测进行检测的疾病数1767种，其中1492种检测应用于临床，275种仅用于研究。 美国早在1996年就开始了基因检测，2004年接受检测的人次数递增至400万，占人口比例1.57﹪，至2007年已有700多万人次。 国内目前已经开展的基因检测项目包括： 遗传病基因检测数十种，如遗传病的染色体检测，地中海贫血基因检测，G-6PD基因检测等； 易感基因型检测400多种，如白细胞抗原（HLA）分型检测、多种癌症、糖尿病、冠心病、心肌梗死、动脉粥样硬化、高血压病、老年性痴呆等； 疾病易感基因检测适合于…... 家族中有某种疾病的遗传病史者。 某类疾病的高风险人群，如近亲或个人罹患慢性疾病，或者常处于污染环境者。 有正确健康意识者。 第 二 节 基 因 治 疗Gene Therapy 二、基因治疗历史 （二）基因载体的选择 基因治疗关键步骤之一，是将治疗基因高效转移入患者体内、并能调控其适度表达。 病毒载体：逆转录病毒(RV)、腺病毒(AV)、腺相关的病毒(AAV)等。 非病毒载体：这类载体的发展较快，目前主要是脂质体。 （三）靶细胞的选择 ---- 分为生殖细胞和体细胞两大类,现阶段只限于应用体细胞 靶细胞选择的原则: 1.易操作; 2.易培养; 3.易接受外源基因; 4.在体内能持久高效表达 目前常用的靶细胞包括：成纤维细胞、淋巴细胞、上皮细胞、造血细胞、肝细胞、肌细胞等 （四）基因转移方法 化学方法——磷酸钙沉淀法、DEAE-葡聚糖法 物理方法——电穿孔法、粒子轰击法（基因枪） 病毒法——主要通过携带有外源基因的病毒载体感染靶细胞来实现基因的转移。 膜融合法——细胞融合法、脂质体介导法、原生质体融合法、微细胞核介导法等 间接体内疗法 目的基因转移到体外培养的靶细胞内高效表达，然后将靶细胞回输体内 直接体内疗法 将目的基因在体内直接转移到靶细胞 载体：需要有特异导向性和高转移效率 （六）回输体内 方式：静脉注射、肌注、皮下注射、滴鼻等 基因修饰的淋巴细胞以静脉注射的方式回输到血液中； 将皮肤成纤维细胞以细胞胶原悬液注射至患者皮下组织； 采用自体骨髓移植的方法输入造血细胞； 或以导管技术将血管内皮细胞定位输入血管等。 腺苷脱氨酶(ADA, Adenosine Deaminase) )缺乏的严重联合免疫缺陷(SCID, severe combined immunodeficiency syndrome) 病因 淋巴细胞缺乏ADA酶 腺苷、dATP堆积 破坏免疫功能 患儿很少活到成年 治疗基本步骤: ADA基因+逆转录病毒载体 导入患者淋巴细胞 体外扩增 回输病人体内 淋巴细胞ADA酶恢复至正常水平的5%-10% 维持免疫系统功能,改善病人症状 基因治疗成功范例 肿瘤的细胞疗法 CIK细胞：细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokines-induced killer cells）； CIK细胞是人体内正常的具有很强杀伤肿瘤细胞作用的免疫T淋巴细胞，但数量很少，在患肿瘤后略有所增加； 体外增殖培养CIK细胞到9-10亿数量后，回输人体，以快速识别并杀伤体内各部位肿瘤细胞，并诱导体内CIK细胞的增殖，从而达到治疗肿瘤的目的。肿瘤的靶向治疗 基因治疗展望 基因治疗展望 关于考试 时间，地点： 见课程网站通知 考试方式： 闭卷 授课ppt，复习题： 见课程网站 成绩评定 平时成绩 网上作业（3次）+平时点名 占40% 课程考试成绩 占60% 自杀基因的类型 胸苷激酶基因thymidine kinase(TK) 胞嘧啶脱氨酶基因cytosine deaminase(CD) 5-FC 5氟胞嘧啶 5-FU 5氟尿嘧啶