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实验六 （红薯/马玲薯/黄地瓜等淀粉块茎类植物）中淀粉含量测定（酸水解法） 综合设计（4学时） 一、实验原理 1、淀粉提取，也称为浆渣分离或分离，是淀粉加工中的关键环节，直接影响到淀粉提取率和淀粉质量。粉碎后的物料是细小的纤维，体积大于淀粉颗粒，膨胀系数也大于淀粉颗粒，比重又轻于淀粉颗粒, 将粉碎后的物料，以水为介质，使淀粉和纤维分离开来。 二、材料、仪器与试剂 （一）材料：马铃薯。 （二）仪器：分光光度计722、小台秤、分析天平、烧杯（100mL）、研钵、容量瓶（100mL）、洗瓶、漏斗、滤纸、具塞刻度试管（15mL）、恒温水浴、移液管（1mL, 2mL）。 （三）试剂 1 2mol/L NaOH 溶液 准确称取4g NaOH固体，溶于15 mL蒸馏水中，并倒入50ml容量瓶中，用蒸馏水分几次清洗烧杯并将清洗的溶液倒入容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。 2 3，5-二硝基水杨酸试剂 准确称取3，5-二硝基水杨酸1g，溶于2mol/L NaOH 溶液20mL，加入50mL蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100mL。盖紧瓶塞，勿让CO2进入。若溶液浑浊，可过滤后使用。 3 0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH5.6） A液（0.1mol/L柠檬酸）：称取C6H8O7?H2O 21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1000mL。 B液（0.1mol/L柠檬酸钠）：称取Na3C6H5O7?2H2O 29.41g，用蒸馏水溶解并定容 至1000mL A液110 mL与B液290 mL 混匀，即为0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH5.6）。 4 1mg/mL 淀粉溶液 称取0.1g淀粉溶于0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH5.6） 100 mL中。 5 20%硫酸 用50mL的量筒量取50mL的水，倒入100mL烧杯中；再用20mL的量筒量取12.6mL98%的浓硫酸，沿内壁缓缓倒入烧杯内的水中，边倒边用玻璃棒搅拌。等冷至室温后，倒入100ml容量瓶中，用蒸馏水分几次清洗烧杯并将清洗的溶液倒入容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。 三、操作步骤 淀粉的制备 1．操作步骤 取一定量马铃薯洗涤→磨碎→加水纱布过滤（滤渣继续粉碎加水过滤）→滤液→白布过滤→静置→倒掉上层液体→加水搅拌静置→布氏漏斗抽滤→烘干 2操作要点： 1洗涤：对生产淀粉的原料进行清洗， 是保证淀粉质量的基础，清洗的越干净,淀粉的质量就越好。 2磨碎：经过洗涤后，送至磨碎机处理。磨碎的目的就是破坏物料的组织结构，使微小的淀粉颗粒能够顺利地从块根中解体分离出来。尽可能的使物料的细胞破裂，释放出更多的游离淀粉颗粒3）筛分：经过磨碎后的马铃薯糊用纱布过滤筛分，在过滤过程中要加水洗涤，滤液为淀粉乳，滤渣再进行2次粉碎过滤。 4过滤后的淀粉乳放在水桶中静置数小时，倒掉上层液体，加水搅拌继续静置数小时。 5脱水干燥：淀粉清洗后，含水分很高，必须脱水，用布氏漏斗抽滤得到含水分为45%的湿淀粉，把湿淀粉放入60℃烘箱烘干即得淀粉成品。称量干燥获得的重量，按照以下公式计算得率。 淀粉含量的测定 （一） 样品淀粉溶液的制备 准确称取0.1g样品，溶于于100ml的容量瓶中，即配成1mg/ml样品淀粉溶液，并在相应的容量瓶上贴上标签。 （二）淀粉标准曲线的制作 取7支洁净的具塞比色管，编号，按表1内容进行操作： 表1 淀粉标准曲线制作 操作项目 操作项目 1 2 3 4 5 6 7 1mg/mL 标准淀粉溶液/mL 0 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 20%硫酸/mL 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 蒸馏水/mL 4.0 3.0 2.6 2.2 1.8 1.4 1 混匀，置于80℃水中水浴反应3~4min，冷却一段时间后 2mol/LNaOH 溶液/mL 1.0+2 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 3,5-二硝基水杨酸/mL 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 混匀，置沸水浴煮沸5min，取出，冷至室温后，以1号为参比溶液， 各试管淀粉含量/mg 0 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 A540 将测定结果记录于表1中，以淀粉含量（mg）为横坐标，吸光度A540为纵坐标，绘制标准曲线。 （三） 样品淀粉的测定 取6支洁净的具塞比色管，编号，按表2内容进行操作。 显色反应后，以0为参比溶液，于540nm处测定吸光度A540，将测定结果记录于表2中。 操作项目 操作项目 0 样品