基于EST数据库的葡萄APETA_省略_A2基因cDNA克隆及其表达分析_王晨.pdfVIP

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2017-07-03 发布于河南
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基于EST数据库的葡萄APETA_省略_A2基因cDNA克隆及其表达分析_王晨

果树学报，（） 2010 27 2 : 207～212 Journal of Fruit Science 基于EST 数据库的葡萄APETALA2 基因 cDNA 克隆及其表达分析 * 王晨，刘洪，房经贵，宋长年，曹雪，杨光，章镇（南京农业大学园艺学院，南京 210095 ）摘要：（）是拟南芥生长发育特别是花器官发育过程中重要的调控基因。利用生物信息学方法以拟 APETALA2 AP2 南芥APETALA2 基因 cDNA 序列作为模板，对葡萄 EST 数据库进行同源检索筛选，电子克隆出葡萄AP2 基因（Vv- AP2 ）cDNA 序列。以香悦葡萄花cDNA 为模板，根据电子克隆的葡萄AP2 基因cDNA 序列设计特异引物，分别利用技术和特异技术获得该基因 ’末端和 ’末端，序列拼接后获得葡萄的基因的全长。 RACE PCR 3 5 APETALA2 cDNA 该的全长为，命名为。核苷酸序列有一个完整的开放读码框（），其 ’ cDNA 2 208 bp Vv-AP2 Vv-AP2 1 536 bp ORF 5 与 ’末端非翻译区分别为和。其中， ’末端含有的 + （）。该基因在基因数据库的 3 268 bp 376 bp 3 28 bp Ploy A GenBank 注册号为 FJ809943 。氨基酸推导结果表明该 cDNA 共编码了 511 个氨基酸，具备完全保守的核定位信号序列（）以及个高度保守的重复序列即结构域。分别采用半定量和实时定量 KKSR 2 AP2 RT-PCR SYBR Green I RT-PCR 初步分析了 Vv-AP2 在葡萄叶、茎、花序、花等不同器官中的表达水平。其中，Vv-AP2 在花序和花中的表达量明显高于叶和茎。关键词：葡萄； Vv-AP2 ；基因克隆；表达分析中图分类号：文献标识码：文章编号： S663．1 A 1009－9980(2010)02－207－06 Cloning and expression analysis of APETALA2 gene from grapevine （Vitis vinifera ）based on EST database