SELEX法筛选果蝇神经特异性拼接因子Dxl6的配体.pdfVIP

±塞塑至 研究生：周静导师：袁榴娣 东南大学发育与疾病相关基因教育部重点实验室 东南大学基础医学院遗传学研究中心 中文摘要 前体mRNA的选择性剪接发生频率很高，它在人类基因组中广泛存在，是增加蛋白 质多样性及基因表达复杂程度的主要原因。近来研究显示，一些富含丝氨酸和精氨酸蛋 白(SR蛋白)对于剪接的顺利完成有着至关重要的作用。SR蛋白是具有帮助识别正确 剪接位点并促进剪接体的成熟的一类重要剪接因子，为组成性剪接所必需，在选择性剪 接中更起着不可替代的作用。 Dxl6基因是2000年克隆的一种新基因。根据氨基酸序列和核酸序列推测它可能是 剪接因子的候选基因。原位杂交显示，Dxl6基因主要在后期胚胎的神经系统表达，与神 胎后期或l龄幼虫致死。P因子插入突变(插入内含子区域)引起三龄幼虫或后期蛹致死， 但约有5％的逃逸者，这些逃逸者发育延迟并发有刚毛、翅膀、眼睛、腿等器官的发育异 常。为了深入研究Dxl6蛋白的功能，了解其在果蝇胚胎和胚胎后期及神经系统发育中 的作用，本文用SELEX方法筛选到了Dxl6可能的作用靶序列。 首先，将Dxl6氨基端含两个RNA识别基序的基因片段构建入原核表达载体，通过 摸索各种条件，成功地以可溶的形式表达了融合蛋白，并用GST亲合层析柱进行了纯 化，给后续的实验提供了较好的工具。 相互作用。 最后，用生物信息学分析了筛选到的Dxl6可能作用的靶序列的二级结构、一致基 序及所在的候选基因，并用RT-PCR检测部分候选靶基因在Dxl6功能缺陷的突变果蝇 中的表达状态，以及Dxl6对这些底物的剪接方式和表达水平的影响，为下面的体外剪 接实验奠定了基础，从而也为探讨Dxl6的调控机制及其在发育中的作用提供数据。 关键词：Dxl6；选择性剪接；SR蛋白；SELEX thesubstrates withDxl6 Identify interacting through SELEX ZHOU YUAN Jing Liudi GeneticsR姻earch MedicalSchool Center,SoutheastUnDe礴ity Abstract Alternative in and exists ofpre—mRNwhichhappenshigh splicing frequencygenerally in themainreasonthatincreasesthe and diversity genome，is ofproteinsmultiplicityofgene researchshowsthat80meSerand aminoacidrich expression．Recent Arg pmteins(SR allessentialrolein isakindof alternative factors splicing．SR protein)play protein