顺序转化筛选与2.2Kb单剪接型乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白HBSP相互作用的肝细胞蛋白.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………………………………… 3 英文摘要………………………………………………………………………… 4 正文 引言………………………………………………………………………… 5 材料和方法…………………………………………………………… 6 结果…………………………………………………………………… 16 讨论…………………………………………………………………… 29 结论………………………………………………………………………… 32 参考文献…………………………………………………………………… 33 附录一 英文缩略词表 ……………………………………………………… 36 附录二 试剂配方 …………………………………………………………… 38 附录三 主要仪器设备 ……………………………………………………… 43 致谢……………………………………………………………………………… 44 综述……………………………………………………………………………… 45 参考文献………………………………………………………………………… 52 2 万方数据 顺序转化筛选与2.2Kb单剪接型乙型肝炎病毒剪接 特异性蛋白HBSP相互作用的肝细胞蛋白 中文摘要 HBV基因组剪接变异体 (splicedvariantsofhepatitisBvirusgenomes 是一 类由HBV前基因组RNA(pregenomicRNA,pgRNA 经剪接并逆转录产生的亚 基因组DNA。其中80%以上的HBV剪接变异体长度为2.2Kb，并可分为双剪接 型和单剪接型，它们所编码的剪接特异性新蛋白与病毒的致病性及持续感染有 关。单剪接型2.2KbHBV基因组剪接变异体与乙型肝炎慢性化有关，同时具有 抗α-干扰素的作用及诱导肝细胞凋亡的作用，还可能与肝脏纤维化有关系。本研 究着眼于该剪接变异体编码的剪接特异性蛋白HBSP （hepatitis B spliced protein），用经典的细胞核酵母双杂交的方法，筛选能够与HBSP相互作用的肝 细胞蛋白，以探索其致病性。 本研究以HBSP 酵母双杂交诱饵载体与肝细胞cDNA文库顺序转化酵母 AH109菌株，转化子涂布营养缺陷型培养基，初步筛选获得678个阳性转化酵 母菌株，经过表型验证，序列测定和酵母体内一对一交配验证实验等步骤后，最 终获得19个可与单剪接型剪接特异性蛋白HBSP相互作用的猎物质粒，其中， HPN （Hepsin）蛋白，α烯醇化酶 （Alpha-enolase,ENO1），细胞色素氧化酶P450 家族成员CYP2A6 （cytochromeP450,family51,subfamilyA,polypeptide）等肝细 胞蛋白有可能与HBV感染，肝细胞凋亡，肝癌的发生以及侵袭转移有关，为深 入探讨HBSP致病性奠定了基础。 关键词：乙型肝炎病毒，RNA剪接，酵母双杂交 3 万方数据 ScreeningfortheHepatocellularProteinsInteractingwith HepatitisBSplicedProteinGeneratedfrom2.2KbSingly SplicedVariantofHBVbySequentialTransformation Abstract