ASIC1a参与小鼠小脑普肯耶细胞发育的机制研究.pdfVIP

中华神经医学杂志 2016 年 10 月第 15 卷第 10 期 Chin J Neuromed , October 2016噜 Vo1.1 5， No .lO • 973 . ·基础研究· ASICla参与小鼠小脑普肯耶细胞发育的 机制研究 尹6告符辈军 肖哲曼卢祖能 430060 武汉，武汉大学人民医院神经内科(尹待现工作单位为武汉市黄肢区人民医 院神经内科) 通信作者:卢祖能，Email: lzn196480@126.com DOI: 1O.3760/cma.j .issn.1671-8925.2016.10.001 [摘要] 目的 探讨 ASICla 参与小脑普肯耶细胞发育的机制。 方法 取 C57BU6 初生小 鼠，通过体外培养得到小脑普肯耶细胞。将原代小脑普肯耶细胞分为实验组和对照组，分别在细胞 发育早期阶段及晚期阶段处理，其中实验组用 shRNA-ASICla 序列重组质粒慢病毒感染以下调 ASICla 表达，对照组用 s且NA- 对照序列重组质粒慢病毒感染。采用免疫荧光染色观察早期阶段和 晚期阶段实验组、对照组小脑普肯耶细胞的形态学结构并计数树突分支;采用 Westem blotting 检测 小脑普肯耶细胞中钙结合蛋白 D-28K、胶质纤维酸性蛋白、Zic 、小清蛋白以及 N- 甲基 -D- 天冬氨酸 受体(NMDAR)的表达;采用 RT-PCR 检测小脑普肯耶细胞中内质网应激相关因子 CCAATI 增强子 结合蛋白同源蛋白(CHOP) 、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)的表达。 结果 免疫荧光染色检测发 现:在早期阶段和晚期阶段，实验组、对照组小脑普肯耶细胞形态学差异明显，对照组小脑普肯耶细 胞的树突生长发育较实验组好;实验组小脑普肯耶细胞的二、兰级树突分支数目较对照组明显减 少，差异有统计学意义(P0.05)o Westem blotting 检测发现:在早期阶段，只有普肯野细胞特异性蛋 白钙结合蛋白 D-28K 表达在实验组中较对照组明显下降，差异有统计学意义(P0.05)。在早期阶段 和晚期阶段，ASICla 表达下调后，实验组 NMDAR 表达较对照组明显上调，差异均有统计学意义 (P0.05)o RT-PCR 检测结果发现:在早期阶段和晚期阶段，实验组内质网应激相关因子 CHOP、 PERK 表达均较对照组明显升高，差异均有统计学意义(P0.05)。 结论 ASICla 在小脑普肯耶 细胞发育机制中发挥着重要作用。 [关键词] 普肯耶细胞; 酸敏感离子通道 la; 内质网应激; N- 甲基 -D- 天冬氨酸受体 (1 )基金项目:国家自然科学基金 (2)基金项目:湖北省卫计委重点项目(WJ2015MA007) (3)基金项目:武汉市科技局 2015 年应用基础研究计划项目(2015060101010047) [中图分类号] R329.2 [文献标志码] A [文章编号1 1671-8925(2016)10-0973-06 Acid sensing ion channel la involving in development of cerebella Purkinje cells Yin Hoo , Fu Hui, Xioo Zhe man, Lu Zuneng Dep耐ment 01 Neurology, Peoples Hospit a1 01 Wuhan University, Wu阳n 430060, Chinα Corresponding author: Lu Zuneng, Email: lzn196480@126.com [Abstract] Objective To investigate the mechanism of acid sensing ion channel (ASIC) la in the development of Purkinje cells in the cerebellurn. Methods Newbom C57Bν6 mice were chosen and Purkinie cells were