VitC测定1.pptVIP

Free template from 生物化学实验 * * 生命科学学院 主讲：刘连芬聊城生命科学学院E-Mail：liulianfen@ 维生素C的定量测定------------ 2，6-二氯酚靛酚滴定法 生 物 化 学 实 验 生命科学学院 生物化学实验 一、提取技术 二、定量技术—滴定法 维生素C的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法 生命科学学院 生物化学实验 一、实 验 原 理 二、主要实验仪器 三、实 验 步 骤 四、实 验 小 结 维生素C的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法 生命科学学院 生物化学实验 Exit VitC具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时， VitC易被氧化而破坏。2，6-二氯酚靛酚滴定法是利用在中性和微酸性环境中， VitC能将染料2，6—二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6—二氯酚靛酚，同时VitC氧化成脱氢VitC。氧化型的2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。当用2，6—二氯酚靛酚滴定含有VitC的酸性溶液时，在VitC尚未全被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被还原成无色。但当溶液中的VitC刚好全部被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的VitC刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2，6—二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型VitC的含量。 VitC的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法 实验原理 生命科学学院 生物化学实验 VitC的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法 2,6—二氯酚靛酚 氧化型的 还原型的 在酸性溶液中 在中性或碱性溶液中 呈现红色 呈兰色 无色 2,6—二氯酚靛酚 碱性溶液中呈兰色 VitC 无色的还原型 无VitC 呈现红色 脱氢VitC 在酸性溶液中 生命科学学院 主要实验仪器 生物化学实验 微量滴定管 滴定管 VitC 的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法 容量瓶 移液管 生命科学学院 生物化学实验 Exit 移液管的使用方法 ⑴看。查看移液管的标示的要求。 ⑵选。根据不同需要选用大小合适的移液管。 （一次取样，就近选择） 酶的特异性及影响酶活性的因素 生命科学学院 生物化学实验 Exit ⑶润。吸取溶液时要把吸管用所吸溶液润洗2-3次。 ⑷ 移液。：一般用右手的大拇指和中指拿住管颈刻度线上方，把管插入溶液中，左手拿吸耳球，把球内空气排出，把吸耳球的尖端接在管口，慢慢松开左手，使溶液吸入管内，当液面升到刻度线上方时，移开吸耳球，立即用右手的食指按住管口，大拇指和中指拿住管刻度线上方，再使管离开液面，管末端仍靠在盛溶液器皿的内壁上。略松食指，使液面平稳下降，直到溶液的弯月面与刻度标线相切。 酶的特异性及影响酶活性的因素 移 液 管 的 使 用 方 法 生命科学学院 生物化学实验 Exit 移 液 管 的 使 用 方 法 ⑸放液。将管插入接受器中，管尖仍靠在接受器内壁，管垂直，并与接收器约呈15度夹角，松开食指，使管内液体自然沿壁流下，遗留在管内的溶液若标有吹的则吹入接收器内，若未标吹的，停留等待3秒钟，同时转动移液管。 ⑹洗涤、放置。将管洗净，放在管架上 。 酶的特异性及影响酶活性的因素 生命科学学院 生物化学实验 Exit 滴定管的使用方法 VitC的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法 生命科学学院 实验步骤 VitC的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法 一、2，6—二氯酚靛酚溶液的标定 二、 VitC的提取 三、 VitC含量测定 四、 VitC含量计算 五、注意事项 生物化学实验 生命科学学院 实验步骤 生物化学实验 VitC的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法 一、2，6—二氯酚靛酚溶液的标定： 取10ml VitC标准液(0.02mg/ml) 于50ml的锥形瓶中，用配制好的2,6—二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉红色出现,并保持15s不褪色，即滴定终点，此时所用染料的体积相当于0.1mg VitC ，由此可求出每ml2，6—二氯酚靛酚溶液相当于VitC的mg数。 生命科学学院 二、VitC的提取 生物化学实验 Exit VitC的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法 称取新鲜猕猴桃1--2g，于研钵中，加入10ml2%草酸溶液研磨成匀浆液。将匀浆液移入100ml容量瓶中，可用1%草酸溶液帮助转移，然后用1%的草酸稀释至刻度，充分摇匀 ，静止几分钟后过滤。（弃去最初流出的几毫升溶液） 生命科学学院