细胞凝集反应.docVIP

生命科学学院 Life Science College 细 胞 生 物 学 实验报告 姓名：柳伟雄 班级：2013级生科一班 学号：201300140062 同组者：曾玮璠 山东大学实验报告 2015年4月19日 姓名：柳伟雄 系年级：生科一班2013级 同组者：曾玮璠 科目：细胞生物学实验 题目：细胞凝集反应 一、目的和要求 1、了解细胞的表面结构。 2、掌握细胞凝集的原理。 3、掌握细胞凝集实验的操作方法。 4、掌握普通光学显微镜的使用方法。 二、原理 1、在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（糖萼）。目前认为，细胞间的联系、细胞的生长和分化、肿瘤的发生与免疫反应都与细胞表面的分枝状糖分子有关。 2、凝集素是一类含糖（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，即糖蛋白，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素能与细胞外被中的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的作用，从而凝集细胞。凝集素引起的细胞凝集，其细胞膜结构没有发生改变。与血液凝固中发生的复杂生化反应完全不同。 3、竞争性抑制实验：凝集素能与不同的糖蛋白特异性结合，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞凝集。 三、试剂和器材 1、实验材料 家兔（或2%家兔红细胞悬液）、土豆块茎（或由土豆块茎制作的可溶性土豆凝集素粗提取液）、PBS缓冲溶液（磷酸缓冲溶液）、柠檬酸钠溶液、0.9%的氯化钠溶液（生理盐水） 2、实验器材 5ml注射器、酒精棉球、双凹片、载玻片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管 四、实验步骤 1、2%家兔红细胞悬液制备：以无菌方法抽取家兔耳缘静脉血液1ml（5ml注射器中先吸取3ml柠檬酸钠溶液），用0.9%的氯化钠溶液洗5次，3000r/s离心5min，最后按沉淀的红细胞体积用0.9%的氯化钠溶液配成2%的红细胞悬液。 2、土豆凝集素制备：称取去皮土豆块茎2g，切成薄片，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出粗提液中含有可溶性土豆凝集素。 3、细胞凝集反应：双凹片土左侧滴土豆凝集素1滴，2%家兔红细胞悬液1滴；右侧滴PBS缓冲液1滴，2%家兔红细胞悬液1滴。在双凹片上混匀，摇动。 4、低倍镜下观察。 山东大学实验报告 2015年4月19日 姓名：柳伟雄 系年级：生科一班2013级 同组者：曾玮璠 科目：细胞生物学实验 题目：细胞凝集反应 五、实验结果 实验结论 所加试剂 土豆凝集素1滴， 2%家兔红细胞悬液1滴 PBS缓冲液1滴， 2%家兔红细胞悬液1滴 实验现象 发生了细胞凝集反应 未发生细胞凝集反应 实验照片 加入土豆凝集素的红细胞 加入pbs缓冲液的红细胞 山东大学实验报告 2015年4月19日 姓名：柳伟雄 系年级：生科一班2013级 同组者：曾玮璠 科目：细胞生物学实验 题目：细胞凝集反应 加入土豆凝集素的红细胞5min 加入pbs缓冲液的红细胞5min 加入土豆凝集素的红细胞10min 加入pbs缓冲液的红细胞10min ②、低倍镜观察（10×4） 山东大学实验报告 2015年4月19日 姓名：柳伟雄 系年级：生科一班2013级 同组者：曾玮璠 科目：细胞生物学实验 题目：细胞凝集反应 实验组 对照组 加入土豆凝集素的红细胞10min 加入pbs缓冲液的红细胞10min 六、注意事项 1、在使用双凹片的过程中因操作不熟练，经常造成两个孔中的液体混合。在使用双凹片时要注意摇动的技巧，不可前后或左右单一地摇动，应该一手固定，一手成环形方向摇动，使凹槽内的液体转动起来。