细菌染色技术.pptVIP

一、实验目的 1 学习并初步掌握革兰氏染色法;进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术. 2 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性 3、学习并初步掌握芽孢染色法;了解芽孢杆菌的形态特征。 二、实验原理 G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。 G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。 三、实验材料 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌（24h培养物） 枯草芽孢杆菌（30h培养物） 革兰氏染色液、芽孢染色液一套 显微镜 四、实验步骤 革兰氏染色 枯草杆菌的芽孢染色观察 观看鞭毛、荚膜的示范片 革兰氏染色法 1. 涂片、干燥及固定 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1-2分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约25秒，后立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染2分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果图。 五、实验结果 记录所观察到的两种菌的革兰氏染色结果(说明各菌的形状、颜色和革兰氏染色反应等）并绘图； 记录枯草杆菌芽孢染色结果，并判断是阳性还是阴性，绘图。 六、问题与讨论 * * 实验二 细菌染色技术（包括细菌的革兰氏染色及特殊结构染色） 1、革兰氏染色原理 2、芽孢染色原理 细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色(芽孢呈无色透明状)。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。 方法一 1、制备菌液：加1-2滴蒸馏水于试管中，从斜面挑取2-3环的菌苔于试管中并充分打匀，制成浓稠的菌液。 2、加染色液：加5%孔雀绿2-3滴于试管中用接种环搅拌，使其充分混合。 3、加热：将此试管浸于沸水浴中，加热15-20分钟。 4、涂片：从试管底部挑菌液于洁净的玻片上，涂成薄膜，晾干。 5、固定：将涂片通过微火3次。 6、脱色：水洗，直到流出的水中无绿色为止。 7、复染：加番红染色2-3分钟后，倾去染色液，不用水洗，直接用吸水纸吸去余水，于酒精灯火焰上烘干。 8、镜检：用油镜观察绘图。 芽孢染色 方法二 1、 涂片、干燥及固定 2、加温染色：加5%孔雀绿染色液于玻片上，微火加热至冒蒸汽维持5分钟。 3、水洗 将玻片冷却，水洗直到流出的水中无绿色为止。 4、常温复染：加番红染色2分钟后，倾去染色液，水洗，直接用吸水纸吸去余水。 8、镜检：用油镜观察绘图。 革兰氏染色 放大倍数_×__ 菌种______ Gram Stain of Staphylococcus aureus Gram Stain of Escherichia coli A Gram Stain of a Mixture of Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria. 芽孢染色结果 1.?????你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节是什么? 2、 现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。你应如何确保你的染色结果的正确性。 3、 你的染色结果是否正确?如果不正确，清说明原因。 4、进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题? 5、你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果?在什么情况下可以采用 6、如果在芽孢染色涂片中出现大量游离的芽孢，你认为可能的原因是什么? *