电针对大鼠胃粘膜胃泌素和EGFR表达及AgNOR的影响论文.docVIP

　　电针对大鼠胃粘膜胃泌素和EGFR表达及AgNOR的影响论文 .freelal groucosa;im-munocytochemistry Abstract:AIM To observe the effect of electroacupuncture stimulation of zusanli on the expression of Gas and EGFR in gastric mucosa in order to probe mechanisms of acupuncture.METHODS 75SD rats ized into5groups:Control group，non-point group，zusanli group，sanyinjiao group and unite point group.All rats ented on consciousness.Immunohistochemical staining by means of SABC or SP technique ucosa.Meanucosa cells ucous tissue of the zusanli group after EA shoucous tissue ulation of zusanli can enhance the expression rate of EGFR and Gas in gastric mucoas，but exert no effects on the proliferation of gastric mucous cells. 0 引言 中医认为，经脉与脏腑相关，针刺经络腧穴可调节脏腑功能［1］ .但针刺如何调节脏腑功能，经穴与脏腑功能联系的本质是什么?尚不清楚.前期研究发现针刺胃经腧穴引起胃运动及胃分泌功能变化［2］ ，同时，胃泌素［3］ 、胃动素［4］ 、生长抑素［5］ 、表皮生长因子［6］ 等浓度发生变化.电针足三里引起兴奋性肽类激素浓度降低如血浆及胃液Gas减少［7］ ;引起抑制性肽类激素浓度增加如胃液及胃粘膜EGF增加［6］ ，同时发现胃酸分泌降低［8］ .胃肠肽类激素与相应受体结合后发挥作用.现探讨电针足三里是否引起Gas受体及EGFR变化及胃腺细胞核增殖变化. 1 材料和方法 1.1 材料 SD种系大鼠（本校实验动物中心提供），体质量（200±50）g，12～14ol L-1 ，pH=7.4），AgNOR工作液均由本实验室配制. 1.2 方法 大鼠在无麻醉、无创伤、完全清醒状态下接受电针刺激.穴位选取参照“中国兽医针灸学”，“大鼠的解剖和组织”而定.G6805-A型电针治疗仪（广东汕头医疗仪器厂生产）参数选择，频率范围2～15Hz，空载电压20～35V，调制脉冲为疏密波，电针时间30min，以双下肢轻微颤抖为宜.空白对照组不行针刺，其他条件与针刺相同.同一时辰电针双侧穴位.所有大鼠于电针结束前禁食24h，自由饮水，结束后即刻im846合剂10mL kg-1 ，麻醉后即刻剖腹取胃组织1.0cm×0.3cm×0.5cm，立刻置于40g L-1 多聚甲醛固定2h，然后经洗涤、脱水、透明、浸蜡和包埋后形成石蜡块.①免疫组化染色 采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶技术（SP法）.具体步骤如下:石蜡组织块切片（厚4μm），贴于涂有多聚赖氨酸的载玻片上;60℃烘烤1h后，37℃恒温箱内烘烤2d;逐级二甲苯脱蜡;递度乙醇至水;PBS洗3次，过氧化酶阻断10min;PBS洗3次，胃蛋白酶消化（37℃，20min）;PBS洗3次，非免疫性动物血清孵育（37℃，5min）;PBS洗3次，加第一抗体（抗EGFR1:50，抗Gas1:100）孵育（37℃，60min）;PBS洗3次，加生物素标记的第二抗体孵育（37℃，10min）;PBS洗3次，加链霉亲和素-过氧化物酶孵育（37℃，10min）;PBS洗3次，加DAB显色（3～10min），自来水冲洗，苏木素浅染，还蓝，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封闭，显微镜下观察、摄影.以正常大鼠血清替代一抗作为替代对照.以PBS代替―抗作空白对照;已知阳性标本作阳性对照（生物技术公司提供）.结果判断以组织细胞中棕黄色细颗粒状染色存在为阳性.每一切片随机取5个视野，各计数20个细胞，计算阳性细胞所占比例，以-，+，，分级和统计.②Ag-NOR特染 取甲液（明胶粉2g，溶于双蒸水中至99mL，60℃使之完全溶解，然后加入纯甲酸1mL，摇匀待用.）10mL，乙液（硝酸银50g，溶于双蒸水至100 mL，充分溶解后保存于冰箱）20mL，混合于染色缸中配成AgNOR工作液.具体染色步骤:石蜡切片4μm，脱蜡至水，双蒸馏水