狼疮Ⅱ号对缺乏淋巴增殖基因狼疮鼠Th1-Th2细胞因子谱的影响论文.docVIP

　　狼疮Ⅱ号对缺乏淋巴增殖基因狼疮鼠Th1/Th2细胞因子谱的影响论文 吴元胜，欧阳杰，禤国维，梁德洪 【摘要】 【目的】探讨中药狼疮Ⅱ号对缺乏淋巴增殖基因(MRL/lpr)狼疮鼠Th1/Th2相关细胞因子谱的影响。【方法】选用自发性系统性红斑狼疮(SLE)模型MRL/lpr狼疮鼠40只，随机分为空白对照组、狼疮Ⅱ号组(中药组，剂量为20 g·kg-1·d-1)、强的松组(西药组，剂量为6 mg·kg-1·d-1)、中西结合组(20 g·kg-1·d-1狼疮Ⅱ号+6 mg·kg-1·d-1强的松);连续用药8周后，采用Floix流式检测技术对血清中多种Th1/Th2细胞因子进行芯片式集成测定。【结果】与空白对照组比较.freelic lupus erythematosus，SLE)是自身免疫病的原型代表，B细胞高度活化是其发病中最为关键的因素之一。B细胞异常活化、增殖和分化，导致B细胞多克隆激活，产生多种自身抗体，损伤自身组织和器官1。近年来，随着对细胞因子的深入研究，发现B细胞的活化受多种T细胞亚群及多种细胞因子尤其是白介素的调节，B细胞活化、增殖、分化的每一阶段都需要细胞因子的参与，细胞因子网络在B细胞过度活化和抗体产生中起着重要作用1-3。Th1/Th2细胞因子平衡代表着机体复杂的细胞因子网络，调整这个网络的平衡在SLE的治疗中具有一定的临床应用潜力。 缺乏淋巴增殖基因(MRL/lpr)狼疮鼠是一种较好的自发性SLE动物模型，其发病后症状与人类红斑狼疮相似，包括显著的血清自身抗体的出现、免疫复合物肾小球肾炎、血管炎等，对探讨SLE的发病机制、病理变化和治疗具有重要意义4-7。狼疮Ⅱ号是在经典名方六味地黄丸的基础上研制的改良验方，具有滋阴清热、凉血解毒的作用。本研究在前期运用该方治疗活动性SLE患者获得了较为肯定的临床疗效基础上8-10，采用基于微球技术的液相蛋白流式检测——Floix技术，探讨狼疮Ⅱ号对MRL/lpr狼疮鼠外周血Th1/Th2相关细胞因子谱的影响，现将结果报道如下。 1材料和方法 11实验动物缺乏lymphoproliferation(lpr，淋巴增殖)基因(MRL/lpr)小鼠购自中国科学院上海实验动物中心，合格证号：SCXK(沪)20070005，雌性，12周龄，体质量(252±28)g，饲养在广东省医学实验动物中心无特定病原体(SPF)级实验动物室层流柜，室内保持(25±1)℃，自由饮水、进食，采用12 h ∶12 h昼夜间断照明，每周换水3次，换垫料2次，SPF级饲料产自广东省医学实验动物中心。 12药物中药复方狼疮Ⅱ号由广州中医药大学第二附属医院制剂科提供，该方由山萸肉、生地、茯苓、泽泻、牡丹皮、青蒿、甘草等组成，先后加蒸馏水1 000 mL和500 mL，煮沸2 h和15 h，合并2次药液，过滤，旋转蒸发浓缩，制成含生药浓度200、400 mg/mL两种浓度的水煎剂，高压灭菌后备用;强的松(醋酸泼尼松片)由广东三才医药集团有限公司生产(批号。 13主要试剂和仪器粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、干扰素γ(IFNγ)、白介素1α(IL1α)、白介素2(IL2)、白介素4(IL4)、白介素5(IL5)、白介素6(IL6)、白介素10(IL10)、白介素17(IL17)、肿瘤坏死因子α(TNFα)的mouse Th1/Th2 Floix可溶性细胞因子检测试剂盒(由奥地利Bender Medsystems公司提供); FACSCalibur 流式细胞分选仪(美国BD公司);MAVM 0960R密理博真空抽滤装置(美国Millipore 公司);Floix Pro Softs公司提供)。 14动物分组与治疗方法40只小鼠随机分为4组，每组10只，分别为空白对照组，予以生理盐水灌胃;中药组，予以狼疮Ⅱ号20 g·kg-1·d-1剂量灌胃(人等效剂量的2倍);西药组，予以强的松混悬液6 mg·kg-1·d-1剂量灌胃;中西结合组，予以狼疮Ⅱ号20 g·kg-1·d-1加强的松混悬液6 mg·kg-1·d-1剂量灌胃。各组灌胃给药容积20 mL/kg，西药组、中西结合组分别给予各药的生理盐水混悬液。 15观察指标及标本处理从13周龄起，上述各组饲养、用药8周，末次给药24 h后的上午9∶00时至10∶00时同批各鼠眶后静脉丛采血，置于具有肝素的试管中，离心，取血清置-20℃保存。 16Floix流式检测将待检样品从-20℃冰箱中取出，置于37℃复苏30 min;按流式微球阵列检测试剂盒操作说明准备好分析缓冲液、标准品、微球、生物素偶联剂及亲和素标记藻红蛋白(phycoerythrin，PE)，以每孔50 μ