顾峥-------活组织块保存与存活的实验观察.pdfVIP

· 诊断病理学杂志2004年8月第11卷第4期 ·281 活组织块保存与存活的实验观察 顾 峥，黄靖香 (解放军总医院病理科，北京100853) [关键词]组织块；保存；存活率 [中图分类号】R361．2[文献标识码]B[文章编号】1007—8096(2004)04—0281—01 细胞冻存与复苏在医疗、生物、优生学等多个领域已广 天换液，第3天长出单层细胞。F组次之，复苏后接种到培 泛应用，但对于一些难得的组织，因实验工作的原因还需要 养瓶中，第3天见培养液变酸，第4天见单个细胞长出。B 重复实验，反复培养，或直接用组织块接种到动物体内。为 和C组，第一次培养均能存活，惟有D组最差，活细胞率为 了减轻患者的痛苦和减少反复取材的麻烦及浪费，我们以人 0。E组虽然有少数组织块周围长出单个细胞，但其活力低， 胚肌肉小组织块为材料，用组织块方法保存，观察其活细胞 活细胞率为10％(表1)。 率和培养细胞的存活率。 时再取材死细胞率100％，培养后观察无细胞存活(图1，2)。 1材料与方法 表1第5、10和20天取材培养结果+ 1．1材料①细胞原代培养器械和各种器皿，见参考文献 [1]；②5ml塑料冻存管20个，20IIll玻璃瓶10个；③取人胚 肌肉50g(要求肝功正常，无遗传病史)；④防冻液：DMEM培 养液60“，胎牛血清30IIll，二甲基亚砜(DMS0)10 ml(pH7)； ⑤保存液：DMEM培养液70“，胎牛血清30 mJ(pn7)。 1．2方法 1．2．1取材无菌消毒，取人胚肌肉50 g置平皿中，去掉脂 肪、肌膜和肉眼能看到的血管神经置于烧杯中。采用小组织 块贴尼龙纱巾法培养怛J。 1．2．2分组A组：取好材后用Hanks液洗3遍，锐剪剪成 3讨论 1—3turn大小的组织块，加Hanks于烧杯中，反复吹打10次， 在细胞生物学技术越来越普及和深入的今天，如何得到 将上清液中的悬浮组织块及细胞离心5min，弃上清，加 最佳的组织块保存条件是十分有价值的课题，我们的实验证 DMEM培养液(含20％的胎牛血清，pH7．0)，打匀后分装到放 明：①小组织块培养以离体时间越短，培养细胞的存活率越 有纱巾(孔径100目)的培养瓶中，每瓶6rnl，纱巾上为小组 高。细胞生长活跃，繁殖快，产量高，培养第10天活细胞数 织块，纱巾下层为悬浮的肌细胞及少量红细胞，置37。C，5％ 达3×105／ml。②小组织块长期保存以液氮逐级慢速降温效 c02温箱中培养，此组为对照组。 果好。快速投入液氮中的组织无一存活，可能是快速冷冻， B和C组：将加保存液的组织块分装lO瓶，每瓶20“ 细胞内溶液急速降温结冰，浓度增高，细胞内体积骤缩，加之 小组织块悬液，取5瓶置4。C冰箱(为B组)。取5瓶置37。C 复温过程中，胞内冰再结晶所造成细胞的损伤。③短期保存 温箱培养(为C组)。 以组织块加保存液，置37％温箱效果好，30天内还有