MF071-M5 BCA Protein Assay kit - 北京聚合美生物科技有限公司.DOCVIP

M5 BCA Protein Assay kit使用说明书 产品名称 单位 货号 M5 BCA Protein Assay kit 500T MF071-01 【储存条件】 BSA Standard Solution 2-8?C保存。其他组分室温保存。 【产品简介】 BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA（Bicin-choninic Acid）法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物，同时将Cu2+还原成Cu+。BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物。在562 nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白（BSA）溶液作为蛋白质标准品溶液，测定范围为20～2000 μg/ml。 【产品组分】 M5 BCA-A 2x 50 ml室温保存M5 BCA-B 3 ml 室温保存 BSA Standard Solution（2mg/ml） 2 ml2-8?C保存 【注意事项】 1．本产品可以采用分光光度计（试管检测法）或者酶标仪（微孔检测法）测定蛋白浓度。 2．建议每次测定蛋白样品时，绘制标准曲线，以获得准确数据。 3．BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致（可用1×PBS或0.9%生理盐水稀释）。 4．如待测样品中含较多的干扰物质（具体见附表1），可采用Bradford法蛋白定量试剂盒或其他蛋白定量产品。 【操作步骤】 稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。 管号 稀释液用量（μl） BSA标准品用量（μl） BSA标准品最终浓度（μg/μl） A 0 100 2 B 200 200 1 C 200 200（从B管中取） 0.5 D 200 200（从C管中取） 0.25 E 200 200（从D管中取） 0.125 F 200 200（从E管中取） 0.0625 G 200 0 0（空白） 2．配置BCA工作液：1）计算BCA工作液总量：BCA工作液总量=（BSA标准品样本个数+未知样本个数）×复孔数×每个样本BCA工作液体积 举例：BSA标准品样本个数为7个，未知样本个数2个，复孔数3个。 试管检测法： BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×2 ml/每个样本工作液体积=54 ml 微孔检测法： BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×200 μl/每个样本工作液体积=5.4ml 2）根据计算出的BCA工作液需要总量，将BCA-A和BCA-B按照50:1的体积比，配制BCA工作液，充分混匀。 注意：1）由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1-2个孔。 2）新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24小时。 3．定量检测3a. 试管检测法（蛋白浓度检测范围：20-2000 μg/ml）1）按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各100 μl分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。2）向每个试管中各加入2 ml BCA工作液，充分混匀，37?C水浴中孵育30分钟 ，将各管冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。3）用分光光度计在562 nm处，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。4）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。3b. 微孔检测法（蛋白浓度检测范围：20-2000 μg/ml）1）按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各25 μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。2）每孔加入200 μl BCA工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37?C孵育30分钟，冷却至室温，须在3