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微生物学通报 JAN 20, 2011, 38(1): 131−137 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 生物实验室 马铃薯病毒一步法多重 RT-PCR 检测技术的构建 1 2 1* 1 3 3 3 董代幸 张祥林 罗明 韩剑 冯世强 唐德贤 岳仲海 (1. 830052) (2. 830063) (3. 830000) 摘 要: 根据马铃薯病毒PVX 、PVY 、PVA 、PLRV 的CP 基因序列设计4 对特异性引物, 通过对 试剂浓度和反应条件进行优化, 建立了能够同步检测 PVX 、PVY 、PVA 、PLRV 的一步法多重 RT-PCR 检测方法。该方法对PVX 、PVY 、PVA 、PLRV 扩增出的靶带大小分别为732 、422 、132 和336 bp, 凝胶电泳易辨别区分。病毒RNA 最低检测限度为7.8 pg/μL, 对PVM 、PVS 、AMV 、 TMV 及PSTVd 的扩增为阴性。研究结果表明, 该方法特异、灵敏, 比两步法多重RT-PCR 检测更 加快速、简便, 提高了检测效率, 降低检测成本, 为马铃薯病毒的高效检测提供了有效手段。 关键词: 一步法, 多重RT-PCR, 病毒检测, 马铃薯 Development of one-step multiplex RT-PCR for simultaneous detection of four potato viruses DONG Dai-Xing1 ZHANG Xiang-Lin2 LUO Ming1* HAN Jian1 FENG Shi-Qiang3 TANG De-Xian3 YUE Zhong-Hai3 (1. Agronomy College, Xinjiang Agricultural University, Urumqi, Xinjiang 830052, China) (2. Xinjiang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Urumqi, Xinjiang 830063, China) (3. The Seeds Station of Urumqi County, Urumqi, Xinjiang 830000, China) Abstract: One-step multiplex reverse transcription polymerase chain reaction (M-RT-PCR) was estab- lished and optimized for the simultaneous detection of potato virus X, potato virus Y, potato virus A and potato leafroll virus. The primers fo
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