紫外可见分光光度计的使用 实验一 紫外.docVIP

J I A N G S U U N I V E R S I T Y 实 验 报 告 系别：药 学 院 班级：制药0901 姓名：张 丽 琴 学号：3090902007 实验二 紫外-可见分光光度计的使用 试验目的 了解紫外-可见分光光度计的基本结构与特点，掌握仪器的使用方法。 熟悉测绘吸收曲线的一般方法 掌握紫外-可见分光光度法定量的方法 熟悉平行原则的应用 试验原理 电子跃迁原理 实验步骤 （一）仪器的使用方法 1、接通电源，打开样品室盖，预热20min 2、比色皿的使用：比色皿不用时浸泡于醇溶液中；使用时手拿比色皿的毛玻璃面，将比色皿用蒸馏水冲洗几遍，然后用待测溶液冲洗两次，然后将待测溶液加入比色皿中，加入溶液体积约为比色皿的2/3或3/4；将比色皿外壁用卷纸擦干，并且保持透光面洁净，不能有影响光透过的纸屑或痕迹。将比色皿放入光路中，注意比色皿在光路中的方向最好始终保持一致； 3、选择波长，比色皿中置空白溶液，打开样品室盖调节使T读数为零，关上样品室盖调节使T 为100%，反复调节几次，直至读数稳定。(注：改变波长时均需重新调0和100%) 4、比色皿配对。将其他比色皿盛放相同的空白溶液，测定其他比色皿与刚才调0，调100%的比色皿的吸光度差值，并且记录。选择吸收值小的比色皿作为对照皿；记录其他比色皿与对照比色皿的差值。测定时顺序勿颠倒。 5、测定物质吸光度。测定时溶液浓度从稀到浓测定。每次荡洗比色皿1~2次。注意勿将溶液洒于样品室，否则须立即擦干。 6、记录吸光度值。 7、测定完毕洗净比色皿，置于醇溶液中，关闭电源。 （二）标准曲线的制作样品溶液的测定： 配置浓度为0.5000mg/ml的标准苯甲酸钠储备液100ml。 标准溶液的配置 分别吸取标准苯甲酸钠储备液1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml至5只100ml量瓶中，用0.1mol/L HCl溶液（9→1000）稀释至刻度，定容，得系列浓度的标准苯甲酸钠溶液。（预先已经配好） 标准曲线的制作 以0.1mol/L HCl溶液为参比，分别测定各溶液在240nm处的吸收度A值，以A为y轴，进行线性回归，得工作曲线和相关系数r。 样品溶液测定：精密吸取样品溶液2.0ml至100ml容量瓶，用0.1M HCl稀释至刻度。 计算样品液的浓度。 6、数据记录： 编号 1 2 3 4 5 6 待测液体 C(μg/ml) 0 5 10 15 20 25 A240nm 0.008 0.148 0.313 0.433 0.533 0.620 0.477 （三）实验结束 1、测定完毕将台面清理干净。 2、绘制标准曲线，求待测溶液浓度。 每次测量后的结果需减去0.008，则结果为： 编号 1 2 3 4 5 6 待测液体 C(μg/ml) 0 5 10 15 20 25 19 A240nm 0 0.140 0.305 0.425 0.525 0.612 0.469 当A=0.496时，带入y=0.0233x+0.0522得：x=19, 即：待测液浓度为19(μg/ml). 注意事项 吸收池配对。 注意比色皿每次测定时的方向。 比色皿要保持清洁，池壁上液滴应用绸布或擦镜纸擦干，不能用手拿透光玻璃面。 测定吸光度，溶液由稀至浓进行测定。 遵守平行原则（加试剂的量、顺序、时间尽量一致） 测定样品前应检查所用溶剂在测定样品所用波长附近是否有吸收，要求不得有干扰吸收峰。 样品溶液浓度应适当，一般应使测得的吸收度控制在0.2~0.7。 操作结束后，应仔细检查样品室内是否有溶液溢出，若有溢出，必须及时用吸水纸吸干，否则会引起测量误差或影响仪器使用寿命。 仪器各部存放有干燥剂，发现干燥剂变色立即更换或烘干在用。 仪器每次使用完毕后，请用防尘罩罩住。 五、思考题 使用分光光度计时，待测溶液的吸光度数值应控制在什么范围？为什么？如何控制？ 答：待测液的吸光度数值应控制在0.2-0.8之间，因为在这一吸光度范围内测量时读数误差最小；如果被测液的吸光度比较大，那应该稀释后再测量，如果待测液的吸光度比较小，则可以取待测液被稀释之前的适宜浓度时再次测量。 苯甲酸钠