紫外分光光度法有机物的定性与定量分析.pptVIP

紫外分光光度法有机物定性定量 仪器分析实验 一、目的要求 1.掌握紫外分光光度法的基本原理和条件。 2.掌握吸收曲线的测绘和测量波长的选择，了解最大吸收波长的重要性。 3.熟悉朗伯一比尔定律的应用，掌握标准曲线法定量的技术。 4.熟练掌握紫外分光光度计和石英比色皿的使用方法。 二、基本原理 【名称】 苯甲酸 Benzoic Acid 【其他名称】 安息香酸 （carboxybenzene ）、 苯酸（phenylformic acid）、苯蚁酸 【适应】与水杨酸合用于成人皮肤真菌病，浅部真菌感染如体癣、手癣及足癣等，用于食品和药物制剂的消毒防腐剂，一般浓度为0.2%，或用0.5%的苯甲酸钠，溶解度更好。 二、有机物吸收光谱与电子跃迁ultraviolet spectrometry of organic compounds 有机化合物的紫外—可见吸收光谱是三种电子跃迁的结果：σ电子、π电子、n电子。 分子轨道理论：成键轨道—反键轨道。 当外层电子吸收紫外或可见辐射后，就从基态向激发态(反键轨道)跃迁。主要有四种跃迁所需能量ΔΕ大小顺序为：n→π＊ π→π＊ n→σ＊ σ→σ＊ 2　σ→σ＊跃迁 所需能量最大；σ电子只有吸收远紫外光的能量才能发生跃迁； 饱和烷烃的分子吸收光谱出现在远紫外区； 吸收波长λ200 nm； 例：甲烷的λmax为125nm , 乙烷λmax为135nm。 只能被真空紫外分光光度计检测到； 作为溶剂使用； 3　n→σ＊跃迁 所需能量较大。 吸收波长为150～250nm，大部分在远紫外区，近紫外区仍不易观察到。 含非键电子的饱和烃衍生物(含N、O、S和卤素等杂原子)均呈现n→σ* 跃迁。 4 π→π＊跃迁 所需能量较小，吸收波长处于远紫外区的近紫外端或近紫外区，εmax一般在104L·mol－1·cm－1以上，属于强吸收。 （1） 不饱和烃π→π*跃迁 乙烯π→π*跃迁的λmax为162nm，εmax为: 1×104 L·mol-1·cm－1。 K带——共轭非封闭体系的p → p* 跃迁 C=C 发色基团， 但  → *200nm。 max=162nm 助色基团取代  （K带)发生红移。 基-----是由非环或六环共轭二烯母体决定的基准值； 无环、非稠环二烯母体：  max=217 nm （2）共轭烯烃中的  → * 三、仪器与试剂 1.仪器 T6型（或其他型号）紫外可见分光光度计 石英比色皿 1cm 2只 比色管 50mL 6只 吸量管 25mL 、 l0mL 、5mL 各 1支  三、仪器与试剂 2.试剂 1mg/mL苯甲酸标准储备液。 100 ug/mL苯甲酸标准溶液：准确吸取1mg/mL的苯甲酸标准储备液25.00mL，在250mL容量瓶中定容。 四、实验步骤 1.溶液的配制 取50mL的比色管6只，蒸馏水清洗干净，编号，用5.00mL吸量管分别准确加入l00μg/ml的苯甲酸标准溶液0、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置。 准确移取10.00mL苯甲酸试液，在50mL比色管中用蒸馏水定容 四、实验步骤 2.石英比色皿配套性检查 石英比色皿在波长220nm处盛蒸馏水，以在一号格的比色皿为参比，调节其透光率T为100%，测量第二个比色皿的的透光率，透光率的偏差小于0.5%的比色皿可以陪套使用。记录校正值 四、实验步骤 3.有机物的定性 选用苯甲酸试样溶液，以蒸馏水为参比，用1cm的石英比色皿，在波长210～250nm范围内，每隔5 nm测量一次。以吸光度为纵坐标，波长为横坐标，绘制吸收曲线。与苯甲酸标准曲线比对定性。 选择吸收曲线的最大吸收波长λmax=227nm为本实验的测定波长。 四、实验步骤 3.有机物的定性 四、实验步骤 4．标准曲线的绘制 在选定的测量波长λmax=227nm处，以蒸馏水为参比，用1cm的比色皿盛溶液，准确测定以上配制好的各个苯甲酸标准溶液的吸光度A，每个标准溶液读三次取其平均值。以浓度C作横坐标，吸光度A作纵坐标，绘制标准曲线。 四、实验步骤 5.试样吸光度的测定 在测量波长λmax=227nm处，与标准曲线同样的条件下，测量样液吸光度A，测三次取其平均值。