植物离体无性繁殖和脱病毒技术.pptVIP

第四章 植物离体无性繁殖和脱病毒技术 第二节 植物脱病毒技术 要点概述 理解：脱毒苗的意义； 了解：1、病毒在植物体内的分布及危害。 2、植物脱毒苗的鉴定、保存、 应用与繁殖。 掌握：1、无病毒苗概念； 2、植物脱毒的原理和方法。。 无病毒苗 是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。 病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。 潜隐性病毒侵染植物造成症状不明显的慢性危害，不易被发现，尤其危险。 国内外解决作物病虫害的有效途径是培育无病毒苗，实施农作物无病毒化栽培。 一.病毒在植物体内的分布、传播及危害 1.分布 在植物体内的分布具有不均匀性，随植株不同部位和年龄而异。 老叶和成熟组织及器官中病毒含量较高 根尖、茎尖生长点约0.1~1mm区域内，几乎不含病毒。 (原因：分生组织细胞分裂和生长速度快，而病毒在植物体细胞内繁殖速度相对较慢；另外，病毒是通过筛管组织或胞间联丝传播至其他组织细胞的，而茎尖分生组织无分化，没有维管组织。) 2.传播及危害: 病毒在植株个体间的传播分为介体和非介体传播两类 在无性繁殖的种类中，由于病毒通过营养体进行传递，在母株内逐代积累，危害日趋严重。 病原菌的侵染不一定会造成植物的死亡, 却会大大降低植物的生长发育及产量和质量,从而影响其栽培的经济效益。 因此, 脱除病毒及其他病原菌对植物栽培生产是非常必要的。 三、植物病毒的检测及无病毒苗的保存和繁殖 3、抗血清鉴定法  利用抗原与抗体特异反应的特性，用已知病毒的抗血清来鉴定未知病毒的种类，常用的有沉淀反应法、琼脂扩散法、酶联免疫吸附法。其中酶联免役吸附反应（ELISA）是常用的一种方法。 5、分子生物学鉴定法 * 植物受到机械、动物或微生物等伤害后，创伤部位的细胞脱分化而不断增值形成松散排列、无特定结构和功能的非器官化组织。 二、植物脱毒的原理和方法 （一）植物脱毒原理： 1）植物病毒本身不具有主动转移的能力。 在一个植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但在分生组织中不存在维管系统。病毒在细胞间移动只能通过胞间连丝，速度很慢，难赶上活跃生长的茎尖； 2）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性高，竞争抑制了病毒的复制； 3）在植物体内，可能存在着病毒钝化系统，它在分生组织中比其他任何区域具有更高的活性。 4）在茎尖存在高水平内源生长素，也可能抑制病毒的增殖 。 （二）植物脱病毒方法 物理方法 化学方法 生物方法 高温处理 茎尖培养 微体嫁接 珠心培养 愈伤脱毒 热处理脱毒 1.热处理脱毒法 热处理脱毒原理: 病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞DNA一起复制。 热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，失去传染能力。 作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。 热处理的方法： （1）温汤浸渍处理 （2）热空气处理脱毒法 试验母株在高温生长室中生长一段时间，其顶端分生组织比次生分生组织生长迅速，后切取其茎尖分生组织进行离体培养。 生长室温度35-40℃ 光照3000—10000 lx 热处理的优缺点 优点: 方法简单，效果明显。 缺点: 1)具有局限性，不能去除所有病毒。只对圆形病毒（苹果花叶病毒），或对线状病毒（马铃薯卷叶病毒）有效；而对杆状病毒（千日红病毒）无效。 2)热处理后只有小部分植株能够存活。极易使植物材料受热枯死，造成损失 3）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。 生物学方法 包括茎尖分生组织培养、微型嫁接、愈伤组织诱导、珠心组织培养。 1、茎尖分生组织培养 1）原理及依据 病毒在植物体内分布不均，茎尖处含量最少 病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争 2）操作程序 外植体经表面消毒灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，放入培养室内进行培养，并及时观察和记录培养结果。 茎尖培养 1）茎尖大小：一般以带1-2片叶原基为好，大小为0.2-0.3毫米为宜，超过0.5毫米时，脱毒效果差。（外植体过小茎尖存活率低） 2）培养基：能使茎尖快速生长、分化的培养基均适于脱毒。 3）