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MTT法检测细胞活力与细胞密度
MTT法检测细胞活力与细胞密度的关系 实验目的 掌握MTT法检测细胞活力的原理及方法 实验原理 MTT（二甲基噻唑二苯基四唑溴盐）能被各种活细胞（除红细胞外）摄取，在线粒体内被脱氢酶还原，由黄色可溶性溶液转变为不可溶性的紫色甲臜（formazan）颗粒，用一定的裂解液裂解细胞并溶解甲臜，再通过测定溶液的吸光值就可以推测细胞的存活和增殖程度。死亡细胞则无此活性。 由于该法与测定细胞增殖的3H－TdR掺入法在测定细胞增殖时结果平行，且操作简单、快速、无同位素污染，自建立之后已广泛用于研究细胞增殖、细胞损伤、细胞凋亡。美国国立卫生研究院（NIH）癌症研究所1992年将其纳入抗癌药物筛选程序，国内绝大多数实验室由于不具备开展同位素实验的条件，主要用该法进行相关检测。 实验材料、试剂及用品 1、材料：腹水瘤小鼠或人白血病细胞Jurket细胞 2、试剂 （1）D－Hanks液 （2）0.4％台盼蓝生理盐水染液 （3）RPMI1640完全培养液： RPMI1640基础培养液 90% 小牛血清 10% 青霉素 100IU/ml 链霉素 100?g/ml （4）5mg/ml 的MTT（四甲基偶氮唑蓝）：用0.01mol/L、PH7.4的PBS缓冲液配制，溶解后（0.22 ?m滤膜）过滤消毒，4℃避光保存。 （5）细胞裂解液：10％SDS-0.01mol/L HCl或0.04mol/L HCl－异丙醇 实验步骤 1、抽取小鼠腹腔瘤细胞悬液先用D－Hanks液洗涤1～2次，然后用RPMI1640完全培养液调浓度分别为8?106个/ml 、4?106个/ml 、2×106个/ml、1?106个/ml 、0.5?106个/ml。 2、每ml细胞悬液加入100 ?lMTT 溶液，混匀后在CO2培养箱中培养4h。 3、将稀释为不同浓度的细胞悬液按每孔100?l分别加入96孔培养板，每浓度2个重复孔。 4、先对每孔细胞密度进行计数计算，然后每孔加100 ?l细胞裂解液，混匀，静置10min； 5、置酶标仪570nm处测定OD值 6、以密度为横坐标，OD值为纵坐标绘出曲线，观察两者关系。 * * *
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