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GODPOD法测葡萄糖的反应进程曲线
GOD-POD法测葡萄糖的反应进程曲线试验 终点法 平衡法 测定反应完成或达到平衡后底物或产物变化的总量,即测定反应物或产物的浓度。 实验目的 使用葡萄糖测定试剂盒,检测某一浓度的标准液,以观察反应达到平衡期的时间以及显色稳定性时间。 试剂和方法 7.0mmol/L葡萄糖标准溶液 16.7mmol/L葡萄糖标准溶液 GOD-POD法 操作步骤 试剂空白管 测定管 葡萄糖标准溶液 20ul 水 20ul 酶酚工作液 3ml 3ml 操作步骤 在500nm波长下以蒸馏水调零,前20min内每2min记录一次吸光度。10min后每3min记录一次吸光度,观察10min。 用蒸馏水代替样品试剂检测试剂空白的反应时间进程曲线。每2min记录一次吸光度,可记录3~4个吸光度值。 以吸光度为纵坐标,以反应时间为横坐标作图,观察线性期、平衡期出现的时间及显色稳定时间。 注意事项 生化反应是连续的。 整个实验需要记录17个吸光度数据:测定管13(10+3)个,空白管4个。 合理利用等待时间,组间配合。 调零管不动,反应过程中,使用比色皿作为容器水浴。 思考 标准液浓度的选择为什么是7.0和16.7? 若反应未能在规定时间内达到平衡,可能有哪些原因? 结果评价 空白管吸光度变化: 试剂空白的吸光度是否符合要求; 试剂空白的时间进程曲线是否平坦。 测定管吸光度变化: 反应能否在规定的时间内达到平衡; 反应进程曲线应平滑,说明反应过程平稳。
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