实验二、三细菌简单染色和革兰氏染色.pptVIP

细菌的简单染色和革兰氏染色 实 验 细菌的芽孢染色法和鞭毛染色法 一、实验目的 学习并掌握芽孢染色方法。 初步了解芽孢杆菌的形态特征。 学习并初步掌握鞭毛染色法，观察细菌鞭毛的形态特征。 二、实验原理 1.芽孢染色法原理 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。 2. 鞭毛染色法的原理 鞭毛是细菌的运动“器官”，一般细菌的鞭毛都非常纤细，其直径为0.01-0.02μm，在普通光学显微镜的分辨力限度以外，故需要用特殊的鞭毛染色法，才能看到。 鞭毛染色是借媒染剂和染色剂的沉淀作用，使染料堆积在鞭毛上，以加粗鞭毛的直径，同时使鞭毛着色，在普通光学显微镜下能够看到。鞭毛染色方法很多，本实验主要介绍硝酸银染色法。 三、实验器材 1. 仪器：显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载玻片、酒精灯等。 2. 染色液： 芽孢染色液：孔雀绿水溶液，沙黄水溶液 鞭毛染色液：硝酸银鞭毛染色液A液，B液 3. 菌种：枯草芽孢杆菌、变形杆菌 四、实验内容与步骤 1、细菌芽孢染色 （1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。 （2）滴加3-5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。 （3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7.6％）染10分钟。　 （4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。 （5）用沙黄水溶液复染2-3分钟，水洗。 （6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。 2、鞭毛染色 （1）菌种的准备 要求用活跃生长期菌种作为鞭毛染色的观察。 （2）载玻片的准备 将载玻片在含适量洗义粉的水中煮沸约20min,取出用清水充分洗净，沥干水后备用，（也可置95%乙醇中，用时取出在火焰上烧去酒精及可能残留的油迹。 （3）制片 在载玻片的一端滴一滴蒸馏水，用接种环挑取少许备用的菌苔，最好从菌落的边缘取菌苔，注意不要挑上培养基，在载玻片的水滴中轻沾几下。将载玻片稍倾斜，使菌液随水滴缓慢流到另一端，然后平放在空气中干燥 （4）染色 涂片干燥后滴加A液染3—5分钟，用蒸馏水冲洗，或将残水沥干或用B液冲去残水（注意：一定要充分洗净A液后再加B液，否则背景很脏）。洗净A液滴加B液后，将玻片在酒精灯上稍加热，使其微冒蒸汽且不干，一般染30—60秒钟。当菌面出现明显的褐色时立即用蒸馏水冲洗,自然干燥。 （5）镜检 镜检时，如未见鞭毛，应在整个涂片上多找几个视野，有时只在部分涂片上染出鞭毛。菌体为深褐色，鞭毛为褐色。 细菌鞭毛染色要求非常小心细致，染色成功的关键主要决定于：(a)菌种活化的情况，即要连续移种几次；(b)菌龄要合适，一般在幼龄时鞭毛情况最好，易于染色；(c)新鲜的染色液；(d)载玻片要求干净无油污。 * 实验目的 染色原理 染色方法 实验材料 实验内容与步骤 注意事项 实验结果 一、实验目的 1. 学习微生物涂片，染色原理和染色的基本操作技术，从而掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法。 2. 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。 二、染色原理 由于微生物细胞含有大量水分，对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大,机体是无色透明的，与周围背景没有明显的反差,在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。 微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成。所以，微生物细胞表现出两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。 经测定，细菌等电点pH在2-5之间，故在中性、碱性或偏酸性溶液中，细菌的等电点均低于上述溶液的pH值，所以细菌带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱性染料染色的较多。微生物体内各结构与染料结合力不同，故可用各种染料分别染微生物的各结构以便观察。 三、染色方法 (一)简单染色法