实验二细菌的特殊染色技术.pptVIP

实验二 细菌的特殊染色技术 一、目的要求 学习并掌握芽孢染色法。 初步了解芽孢杆菌的形态特征。 学习并掌握荚膜染色法。 二、基本原理 用着色力强的染色剂孔雀绿，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，再用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。 荚膜是包围在细菌胞外的一层粘液状或胶质装物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。所以通常用衬托染色法染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。 三、器材 菌种 枯草芽孢杆菌约2d营养琼脂斜面培养物；褐球固氮菌约2d无氮培养基琼脂斜面培养物。 染色剂 5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，绘图墨水。 仪器和其他用具 小试管，滴管，烧杯，试管架，载玻片，盖玻片，滤纸，木夹子，显微镜等。 四、操作步骤 (1) Schaeffer—Fulton氏芽孢染色法 制片 常规涂片、干燥、固定。 染色 加数滴孔雀绿染液于涂片上，用 木夹夹住载玻片一端，在微火上加热至染料冒蒸汽并开始计时，维持5min。 水洗 待玻片冷却后，用缓流自来水冲 洗，直至流出的水无色为止。 复染 用番红染液复染2min。 水洗 用缓流水冲洗后，吸干。 镜检 油镜观察。芽孢呈绿色，芽孢囊 及营养体为红色。 （2）荚膜的湿墨水染色法 制备菌和墨水混合液 加一滴墨水于洁净 的载玻片上，然后挑取少量菌 体与其混合均匀。 加盖玻片 将一洁净盖玻片盖在混合液 上，然后在盖玻片上放一张滤 纸，轻轻按压以吸去多余的混 合液。 镜检 用低倍镜和高倍镜观察，背 景灰色，菌体较暗，在菌体 周围呈现明亮透明圈即为荚 膜。 注意： 1 芽孢孔雀绿染色加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂膜干涸。 2 芽孢染色水洗时，勿用瀑水对着菌膜冲洗，以免细菌被水冲掉。 3 荚膜湿墨水染色时，加盖玻片勿留气泡，以免影响观察。 五、实验报告 1 芽孢染色结果 绘图表示枯草芽孢杆菌的形态特征（注意芽孢的形状、着生位置及芽孢囊的形状特征）。 2 荚膜染色结果 绘图说明你所观察到的细菌的菌体和荚膜的形态。 六、思考题 用Schaeffer—Fulton氏染色法加热染色时，若因一时疏忽玻片上的染液被烘干，此时能否立即补加染液？为什么？ 若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养体细胞，你认为这是什么原因？ 通过荚膜染色法染色后，为什么被包在荚膜里面的菌体着色而荚膜不着色？ * * 芽孢 荚膜 *