实验二细菌的简单染色和革兰氏染色.pdfVIP

实验二 细菌的简单染色和 革兰氏染色 一 细菌的简单染色 （一）目的要求 （二）基本原理 （三）实验材料 （四）无菌操作过程 （五）简单染色操作步骤 （一）目的要求 1 学习制染色片技术，学习简单染色的原理。 2 学习并掌握无菌操作的技术。 3 掌握简单染色方法、。 4 巩固显微镜油镜的使用方法。 （二） 基本原理 细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下表 现为无色透明，不易观察，所以必须进行染色处理 使细胞着色，便于观察。 简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌 形态、大小、及排列方式。 染色前一般要将细胞固定，其目的是杀死菌体并 使之粘附于玻片上，还可以增强菌体的着色能力。 固定有加热法和化学法两种，无论采用何种方法均 应维持细胞原有形态。 （三）实验材料 大肠杆菌（24 h 培养）斜面菌种 枯草杆菌（16 h 培养）斜面菌种 （四）无菌操作过程 无菌操作：不让除我们接种的微生物以外 其它微生物侵入的技术。 （五） 简单染色操作步骤 1　 涂片： 载玻片、无菌水、斜面菌种、无菌操作、均匀的薄层 2　 干燥： 3　 固定：加热固定 4　 染色： 结晶紫染1min或蕃红染2-3min或石炭酸复红染1min。 5　 水洗： 6 干燥： 7　 镜检： 低倍镜观察以确定目标和范围，再换用油镜观察绘图。 二 细菌的革兰氏染色 （一）目的要求 （二）基本原理 （三）实验材料 （四）操作步骤 （一） 目的要求 1 学习革兰氏染色原理，理解着色机理。 2 掌握革兰氏染色的方法，并能正确染色。 3 学习并掌握无菌操作技术 4 巩固显微镜油镜的使用方法 （二） 基本原理 革兰氏染色是用于细菌鉴别的一种重要染色方法。它是 根据革兰氏阳性细菌、阴性细菌细胞壁结构、组成的不同而 使用一系列的染色处理使之差别显色。其染色方法是先将细 菌分别用结晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脱色，再经复染剂 复染。最终被染成红色的是革兰氏阴性细菌；被染成紫色的 是革兰氏阳性细菌。 ？ 1 2 3 4 革兰氏染色原理： 第一步：结晶紫使菌体着上紫色 第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁 阻留在细胞内。 第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。 G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时， 肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞 内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。 G ˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩， 因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶 出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，蕃红复染后呈红色。 （三）实验材料 大肠杆菌（24h培养）斜面菌种 枯草杆菌（16h培养）斜面菌种 （四）操作步骤 1　涂片：方法同单染色，然后干燥、固定。 2　初染：滴加结晶紫染色1min，后用水冲洗。 3　媒染：滴加碘液染色12min，后用水冲洗，甩尽残余水 4　脱色：用95%乙醇冲洗30秒 （需要严格控制时间和浓度）， 然后立即用水冲洗。 5　复染：用蕃红或石炭酸复红覆盖涂片进行复染，蕃红染 23min，如果石炭酸复红染1min。水洗，晾干。 6　镜检：先用低倍镜观察，后用油镜观察 1 阳性菌 2