一种高效分离大黄酚和大黄素甲醚的简便方法论文.docVIP

　　一种高效分离大黄酚和大黄素甲醚的简便方法论文 王定勇，陈铭祥，冯玉静 【摘要】 目的 研究大黄酚和大黄素甲醚混合物的高效分离方法。方法 采用硅胶柱色谱进行分离，薄层色谱跟踪检测，HPLC检测产品纯度。结果 在以工业级柱层析硅胶（100～200目）为填充剂的色谱柱上，以石油醚乙酸乙酯甲酸(体积比100∶1∶0.5)为洗脱剂，可以将大黄酚和大黄素甲醚完全分离。结论 硅胶柱色谱可以实现大黄酚和大黄素甲醚的高效分离；产品经HPLC检测，纯度达99%以上。 【关键词】 柱色谱法；大黄酚；大黄素甲醚 Abstract:Objective To study the efficient and simple method of separation of chrysophanol and physcion.Methods Using silica gel column chromatography for separation,.freeln chromatography ［100～200 mesh, petroleum etherethyl acetateformic acid (100∶1∶0.5) as elute］. Conclusion Chrysophanol and physcion could be effectively separated by silica gel column chromatography.Their purities ethod. Key n chromatography；chrysophanol；physcion 大黄(Rheum officinale Baill.) 为常用中药,具有泻下、抗菌、抗肿瘤、抗高脂血症、降低血压、健胃、利胆、保肝、强心、消炎、延缓衰老、调节免疫等作用［1］。大黄的主要有效成分是其中的5种游离蒽醌类化合物（见图1）.freelain active anthraquinones of Rheum officinale 1 仪器与试剂 1.1 仪器 RE52cs旋转蒸发器（巩义市英峪予华仪器厂）；电子恒温水浴锅（深圳市国华仪器厂）；SHBⅢ 循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。 1.2 试剂 大黄酚和大黄素甲醚混合物（自制，从大黄中分离得到）；柱层析硅胶（工业级，100～200目，青岛海洋化工厂）；薄层层析硅胶G（化学纯，青岛海洋化工厂）；石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷等均为分析纯（天津市富宇精细化工有限公司）；大黄酚和大黄素甲醚对照品（中国药品生物制品检定所）。 2 方法与结果 2.1 薄层硅胶板的制备 配制质量分数为0.3％的羧甲基纤维素钠(CMCNa)水溶液，与薄层层析硅胶G粉，按3 mL∶1 g的比例配制调浆，以载玻片作为载体铺板，铺好后晾干，于105 ℃下活化1 h，放入干燥器中，备用。 2.2 色谱柱的制备 取一根内径和长度合适的玻璃层析柱，用洗脱剂湿法装柱，用手轻敲柱子，使硅胶装填结实且顶端平整，有效柱长控制在20 cm左右，硅胶用量为样品量的200倍。 2.3 样品的制备 大黄酚和大黄素甲醚的混合物用最少量的三氯甲烷溶解，再加入适量硅胶拌样（硅胶∶样品=20∶1，质量比），待氯仿挥发干后均匀铺于柱顶。 2.4 洗脱 以石油醚（60～90 ℃）乙酸乙酯甲酸(体积比100∶1∶0.5)为洗脱剂，进行洗脱，洗脱液减压浓缩后可循环利用。 2.5 色谱带的定位 洗脱一定时间后可以看见两段明显的色谱带，洗脱得快的那一段为大黄酚，较慢的那一段为大黄素甲醚。继续洗脱，分别得到橙红色颗粒状结晶（大黄酚）和橙黄色针状结晶（大黄素甲醚）。 2.6 薄层色谱鉴定 取制备好的薄层硅胶板，以石油醚乙酸乙酯甲酸（体积比10∶1∶0.5）为展开剂，以对照品作对照，确定橙红色颗粒状结晶为大黄酚，橙黄色针状结晶为大黄素甲醚。 2.7 大黄酚和大黄素甲醚纯度的HPLC检测方法(归一化法) 色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱温为30 ℃ ，进样量为10 μL，流动相为甲醇质量分数为0.1％的磷酸溶液(体积比85∶15)，流速为1.0 mL/min，检测波长为254 nm。检测结果表明大黄酚纯度为99.01%，大黄素甲醚纯度为99.06%。色谱图见图2、3。 图2 大黄酚的HPLC图（略） Fig.2 HPLC of chrysophanol 图3 大黄素甲醚的HPLC图（略） Fig.3 HPLC of physcion 3 讨论 3.1 大黄酚和大黄素甲醚的分离研究，国内已有多篇文献报道：将样品先用经