实验八 羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱分析.docVIP

实验八 对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱分析 一、实验目的 (1) 了解高效液相色谱仪构造。 (2) 了解高效液相色谱分析操作。 (3) 学习高效液相色谱保留值定性方法和归一化法定量方法。 二、实验原理 对羟基苯甲酸酯类混合物中含有强极性化合物对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯，可采用反相液相色谱进行分析，选用非极性的C-18烷基键合相作固定相，甲醇的水溶液作流动相。 由于在一定的实验条件下，酯类各组分的保留值保持恒定，因此在同样条件下，将测得的未知物的各组分保留时间，与已知纯酯类备组分的保留时间进行对照，即可确定未知物中各组分存在与否。 本实验采用归一化法定量，归一化法使用条件及计算公式，与气相色谱分析法相同。而对羟基苯甲酸酯类混合物属同系物，具有相同的生色团和助色团，因此它们在紫外光度检测器上具有相近的校正因子，可用下式： 三 仪器 高效液相色谱（HPLC）系统 四 试剂 1.对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、甲醇等均为分析纯。 2.纯水　　去离子水，再经过一次蒸馏 3.标准溶液的配置 （1） 标准贮备液 分别于四只100mL容量瓶中，配制浓度均为1000 μg.mL-1的上述四种酯类化合物的甲醇溶液。 （2） 标准使用液 用上述四种标准贮备液分别于四只10mL容量瓶中，配制浓度均为10μg.mL-1的酯类化合物的甲醇溶液，摇均备用。 （3）标准混合使用液 于一只10mL容量瓶中，用上述四种标准溶液贮备液，配制浓度均含10 μg.mL-1的酯类混合物的甲醇溶液，摇均备用。 五 实验条件 1.色谱柱 长15cm、内径3mm，装填C-18烷基键合相颗粒度为5μm的固定相 2.流动相 甲醇：水（55:45）， 3.流速 1mL.min-1 4.检测器 DAD检测器，254 nm，灵敏度0.04 六 实验步骤 1.将配制好的流动相甲醇水溶液置于超声波发生器上脱气15min。 2.根据实验条件，将仪器按照仪器操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡时，图谱基线呈平直，即可进样。 3.依次分别吸取5μL的四种标准适用溶液及标准混合使用液个未知试样液进样，记录各色谱图，并重复两次。在每次进样后，于进样信号附近标明进样溶液名称。 七 数据及处理 1.测量三种对羟基苯甲酸酯化合物色谱图的保留时间，并列表。 表1 三种对羟基苯甲酸酯化合物的保留时间 保留时间 组分 tR（min） 对羟基苯甲酸甲酯 对羟基苯甲酸乙酯 对羟基苯甲酸丙酯 2.依次测量混合液色谱图上各色谱峰的保留时间值，然后与上表数据对照，确定各色谱峰代表何种化合物，计算各组分峰面积A及其含量%Ci。。 表2 未知试样色谱图 保留时间 组分 定性分析 定量分析 tR（min） 相应化合物名称 峰面积 相应化合物% 峰1 峰2 峰3 八 思 考 题 1．归一化法定量的使用条件？本实验为什么可以采用归一化法定量？ 2．在高效液相色谱中，为什么可利用保留值定性？这种定性方法你认为可靠吗?