一种快速从细菌中筛选抗真菌活性物质产生菌的平板筛选方法.PDFVIP

第 25 卷 第 4 期 沈 　阳　药 　科 　大 　学 　学 　报 Vol25 　No 4 　 2 0 0 8 年 4 月 Journal of Shenyang Pharmaceutical University Apr 2008 p 3 18 　 ( ) 文章编号 : 2008 0403 1803 一种快速从细菌中筛选抗真菌活性物质 产生菌的平板筛选方法 蔡苏兰 , 刘婷婷 , 阎浩林 , 梁丽莉 (沈阳药科大学 生命科学与生物制药学院 ,辽宁 沈阳 1100 16) 摘要 : 目的 考察从细菌中筛选抗真菌活性物质产生菌的方法 ,为筛选抗真菌类抗生素奠定基础 。 方法 结合管碟法及异步培养法的优点 ,采用改良的 Kekessy 方法 ,从 3685 株细菌中筛选抗真菌活 性物质产生菌 。结果 筛选出28 株抗真菌活性物质产生菌 。结论 改良的 Kekessy 方法可快速有效 地从细菌中筛选出抗真菌活性物质产生菌 ,适合于实验室使用 。 关键词 : 抗真菌活性 ; 细菌 ; 筛选方法 中图分类号 : R 9 14 　　　文献标志码 : A 　　随着高效广谱抗生素 、皮质类固醇 、免疫抑制 实验 中选用 的培养基为 : LB 、P YG 、B P Y 、 剂 、抗肿瘤化疗药物应用的增多 ,深部真菌感染发 PDA 、沙氏培养基等 。 病率持续增加 。尽管自1955 年 Gold 发现了两性 2 　方法 霉素B (AmpB) 起 ,人们就开始了抗真菌抗菌素的 研究 。但由于真菌属于真核细胞型微生物 ,其结 初筛方法 : 采用 Kekessy 检测细菌素 的方 构与人体细胞类似 ,致使作用于真菌的抗生素同 法[6 ] 并略加改进 。将待检细菌分别点种于合适 样对人体细胞造成严重的损伤[ 1 - 2 ] 。此外 ,真菌 的固体培养基表面后于30 ℃培养72 h ,然后利用 抗药性的产生亦使得原本为数不多的抗真菌药物 无菌的接种铲将培养基连同其上的细菌翻转至培 的治疗效果大打折扣 。因此开发高效 、低毒 、价廉 养皿盖上以暴露出无菌的一面 ,然后将混有指示 的抗真菌药物始终是努力的方向。研究表明 ,某 菌株的半固体培养基重新平铺到翻转后的无菌平 些细菌在合适的培养条件下可产生抗真菌类活性 板上 , 于30 ℃培养 24 ～48 h 后观察抑菌圈的大 物质 ,为此各国科研人员正积极从细菌中筛选具 小 。 有抗真菌活性的菌株[3 - 5 ] ,然而实验室 目前常采 复筛方法 :采用管碟法[7 ] 。首先分别将经初 用的方法往往操作繁琐 、费时、费力且检出率较 筛具有抗真菌活性的菌株接种于相对应的液体培 低 ,为此本文作者在 Kekessy 检测细菌素方法的 养基中于30 ℃,200 r ·min - 1 ,培养72 h ,然后将发 基础上 ,提出了一种较适合于实验室使用的相对 酵液离心( 10 000 r ·min - 1 , 10 min) 获得上清液及 简单 、检出结果更为可靠的方法 , 以期为进一步开 沉淀细胞 。对于上清液直接采用管碟法测定其抗 发抗真菌类抗生素提供可靠的参考依据 。 真菌 性 能 ; 沉 淀 细 胞 则 利 用 PB S ( p H70 , 005 mol ·L - 1) 缓冲液洗涤后悬浮于适量的 PB S 1 　材料