骨桥蛋白在内毒素致大鼠急性肺损伤及损伤后肺纤维化中的作用.pdf

在内毒素致大鼠急性肺损伤及损伤后肺纤维化中骨 桥蛋白与炎性因子的相关性研究 摘 要 目的：通过观察骨桥蛋白抗体（Anti-OPN-Ab）对内毒素腹腔注 射所致的 SD 大鼠急性肺损伤及损伤后肺纤维化肺组织中核因子- κB （NF- κB）及炎性细胞因子肿瘤坏死因子（TNF- α）、干扰素γ（IFN- γ）、白细胞介素4 （IL-4）、白细胞介素10 （IL-10）表达水平的影 响，探讨骨桥蛋白在急性肺损伤及损伤后肺纤维化过程中的作用，进 一步阐明肺损伤的发病机制。方法：通过腹腔注射内毒素（LPS）建 立大鼠急性肺损伤及损伤后肺纤维化模型。60 只清洁级雌性SD 大鼠 随机分为3 组，空白对照组（n=20，腹腔注射无菌生理盐水NS），内 毒素模型组（n=20，腹腔注射 LPS，5mg/kg），干预组（n=20，腹腔 注射 LPS，5mg/kg，5 分钟后再次腹腔注射骨桥蛋白抗体 0.5ml，效 价为 1:32）。在随机分为 3 组的基础上又按 3d、7d、14d、28d 不同 时间点随机分为4 组，在0d、1d、2d 连续用药3 天，共3 次，建立 肺损伤后肺纤维化模型。各组大鼠按上述时间点处死，留取标本行相 应检测。①留取右肺下两叶行Masson 染色及HE 染色，了解肺组织镜 下病理变化情况。②右肺上两叶免疫印迹（Western blotting）检测 肺组织匀浆细胞浆与细胞核NF- κB 的表达。③双抗体酶联免疫吸附 法（ELLISA）测定大鼠左肺肺组织匀浆炎症细胞因子 TNF- α、IFN- γ、IL-4、IL-10 的表达。结果：1、NS 组大鼠肺组织HE 染色光镜下 肺泡结构正常，无破坏，无炎性渗出物，肺间隔无增宽及炎性细胞浸 润。内毒素模型组于3d 组开始出现较重的炎症反应即肺泡结构的破 坏，肺泡腔闭陷融合，肺泡间隔断裂，炎性细胞填充于肺泡腔及肺间 质，并伴有出血、水肿，少许蓝色胶原纤维开始沉积在炎症较重的部 位。7 天组炎症反应仍然很重，炎性细胞渗出明显，更多的蓝色胶原 纤维沉积，14d 组炎症反应明显减轻，28 天时炎症反应较前进一步减 弱，但更多蓝色胶原纤维出现在肺损伤部位。干预组上述病理表现均 较内毒素组减轻。2、内毒素模型组及干预组大鼠肺组织匀浆细胞浆 及细胞核NF- κB 的表达在早期就开始升高，与NS 组比较具有明显的 统计学差异（p0.01）且3d、7d 组升高最明显，但细胞浆NF- κB 的 表达在内毒素模型组与干预组之间无差异(p0.05)，而细胞核NF- κ B 的表达在两者之间有显著的统计学差异（p0.01）。3、内毒素模型 组及干预组大鼠肺组织匀浆在早期就可以出现致炎因子TNF- α、IFN- γ升高，同细胞核NF- κB 表达量的升高在时间上存在一致性，仍然 以3d、7d 组最为明显，两组与NS 组比较存在统计学差异（p0.05， p0.01）、后期炎性因子表达量逐渐减少，干预组在致炎因子TNF- α、 IFN- γ表达量上较模型组有明显下降（p0.05,p0.01）。抗炎因子 IL-4、IL-10 在内毒素组及干预组之间仍然较 NS 组有明显升高 （p0.05，p0.01），且与内毒素比较干预组升高更为明显（p0.05）， 但在 14d 时两者之间无统计学差异（p0.05）。结论：多次小量腹腔 注射LPS 能够成功复制急性肺损伤及损伤后肺纤维化模型，损伤最重 的时期在3d 与7d，纤维化最明显的时刻在28d。内毒素模型组肺组 织在早期就开始有NF- κB 及炎症因子TNF- α、IFN- γ、IL-4、IL-10 的升高，表达高峰时间在3d 与7d，以后随时间的推移表达量逐渐下 降。骨桥蛋白参与并促进急性肺损伤及损伤后肺纤维的过程，使用一 定剂量骨桥蛋白抗体可以一定程度上减弱这种损伤。 关键词：急性肺损伤 肺纤维化 骨桥蛋白 NF- κB 炎性因子 The relationship of osteopontin and inflammatory facters at acute lung injury and pulmonary fibrosis rats induced by endotoxin Absteact:Objective:For investigating the role of osteopontin and futher pathogen